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精品文档 小鼠腹腔巨噬细胞制备及提取 实验动物： 6-8 周的 SPF级雄性 BALB/C小鼠 ，小鼠取细胞前三天每天腹腔注射 0.5-1mL 淀粉肉汤，或者取细胞前一小时注射 1mL 淀粉肉汤。 试剂： 75% 乙醇、 RPMI 1640 （ Gibcol/BRL，美国）、含 10%小牛血 清 RPMI-1640液(10%牛胎血清、青霉素 100U/ml 、链霉素 10μ g/ml) 步骤： 1、取 6 周左右的小鼠，剃去腹部的毛并消毒。 2 2、引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入 75%酒精中 3～5 秒。 3、倒立小鼠，置动物于解剖台上，固定四肢， 75%酒精擦洗腹膜壁后，用 9 号 针头 5ml 注射器沿腹中线将预冷的不含小牛血清的 PBS5mL 注入腹腔中，同时从 两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。轻轻按摩腹部 置 5-7 分钟。 2-3 分钟，静 4、无菌条件下，剪开腹壁，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤 及腹膜壁。再用 75%酒精擦洗腹壁。 5、用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸入 注射器内。小心拔出针头。把液体注入 50ml 离心管中。再用同样容量的 PBS冲 洗腹腔 2～ 4 次。合并渗出液于 50 mL 离心管中。直至冲洗液变澄清。 6、4℃ 250×g（1000 rpm/min ）离心 10min，去上清。 7、用 PBS培养液洗涤细胞 3 次，每次 4℃ 250×g（1000 rpm/min ） 离 心 10min， 去上清。 8、用含 10%小牛血清 RPMI-1640液(10%牛胎血清、青霉素 100U/ml 、链霉素 10 μ g/ml) 悬浮细胞。将调整细胞浓度调整至 5×106 cells/mL 加入培养皿中培养 9、将培养皿置于 5% CO2、37℃培养箱中培养 3 h，然用 37℃预温的 RPMI-1640 培养液清洗培养皿 2-3 次，去除未贴壁的细胞，即得到纯化的贴壁巨噬细胞。 种 96 孔板。 2h 细胞贴壁。换液。墨汁（时间短，可以不灭菌）染色。观察。 .