第六章-动物体外受精技术分析PPT课件.ppt

第六章 动物体外受精技术;目录;试管婴儿;1988年3月10日我国首例试管婴儿;根据资料回答下列问题： 1.资料上用到了什么生物技术？ 试管婴儿技术（包括体外受精、早期胚胎培养）和胚胎移植技术。 2.试管婴儿和母亲正常怀孕，生产的过程有何异同？ 相同之处：都通过有性生殖产生，在母体子宫内发育形成胎儿。 不同之处：受精作用在体外，并在体外发育成早期胚胎进行胚胎移植。;;一、基本原理：人工模拟体内环境（包括营养、温度、pH等），使初级卵母细胞成熟，同时使精子获能，最终完成受精作用，并有计划地保存胚胎。 ;;;我国体外受精技术的研究起步于80年代后期，但进展很快，已先后在人和牛等8种动物取得成功。 目前，人和牛的体外受精技术已达到国际先进水平，每年约有近千例试管婴儿诞生，数百头试管牛出生。 1990年我国钱菊芬获得首例试管山羊 旭日干、范必勤等获得试管牛犊 ;三、体外受精的意义;四、体外受精技术环节;五、体外受精技术的应用范围;（二）、应用研究 1. 治疗人类不孕症 2. 为胚胎移植产业开辟大量胚胎来源 3. 家畜品种改良 4. 保种 5. 其他用途;第二节 卵母细胞的获得与体外成熟;（2）卵泡剥离法：用无菌眼科剪刀或刀片，自卵泡周围，将周围组织分离，取下完整的圆形卵泡，放到加油培养液的平皿中，切开卵泡，卵泡液带着卵母细胞流出。 优缺点：程序较为复杂，但是对卵丘-卵母细胞复合体的损伤小。 （3）切剖法：用平行排列成组的剃须刀片纵横切割卵巢，回收液体放在捡胚皿中，37度培养箱静止10min，用注射器吸取上清，镜检卵母细胞。 优点：回收效率较高。;（4）卵巢解剖法： 用手术刀片将卵巢切为两半，去掉中间髓质部分，露出卵泡，然后用刀片划破卵泡，在培养液中反复冲洗，采集其中的卵母细胞。 优缺点：回收速度相对较慢，容易造成污染；能保持卵母细胞周围卵泡细胞的完整性，回收率相对比较高。;2. 卵母细胞的活体采集 （1）腹腔镜法：在腹壁切开一个小口，插入腹腔镜、操作杆和穿刺针，通过操作杆和穿刺针的配合将卵母细胞吸出。 优缺点：比较直观，容易掌握；工作量大，对母牛的损伤较大，不能频繁手术。 （2）B超超声波法：将供体母畜牢牢固定在保定架内，普鲁卡因麻醉，将带有超声波探头和采卵针的采卵器插入到阴道子宫颈一侧穹窿处。而后术者通过直肠将卵巢贴在探头上，根据B超屏幕上显示的卵泡位置进行穿刺，而将卵母细胞取出。 优缺点：不用进行手术，操作速度较快，对母牛损伤小，可频繁反复采卵，也可对妊娠母牛进行采卵；操作技术较难掌握，并需要昂贵的超声设备。;牛卵巢;B超活采仪;活体采集的牛卵母细胞;合格卵母细胞标准：放射 冠细胞扩散良好，质地均 一，放射冠细胞间透明； 透明带清晰；卵母细胞圆 形，直径大小适中，细胞 质质地均匀，色泽柔和， 透明度适中。 2、体外成熟的卵母细胞 1）卵母细胞来源 （1）卵巢来源：从屠宰 场宰杀的母畜获得卵巢， 38 °C生理盐水中保温， 宰杀后 2 小时内运回实 验室。;（2）采集卵母细胞－卵丘细胞复合物：用 38 ℃生理盐水洗涤卵巢 2 次，左手持卵巢，右手持注射器，如图所示，抽取 3－5mm 卵泡的卵泡液及卵母细胞－卵丘细胞复合物，置于20ml试管内，静置待检。 选择 3~5 mm卵泡的原 因是：更大卵泡的闭锁 比例可能较高，更小卵 泡的发育程度可能低。;镜检卵母细胞－卵丘复合物： 用吸管吸取经静置后试管底部的混合物于平皿中，用吸管铺平，在实体显微镜下用吸管检出卵母细胞－卵丘复合物，置于另一平皿中，用洗涤液在实体显微镜下洗涤2次，在洗涤过程中要剔除不合格的卵母细胞－卵丘复合物。选择合格的卵母细胞－卵丘复合物非常重要，否则将降低卵母细胞的成熟比例。;卵母细胞－卵丘复合物分类标准 a、分类依据：卵母细胞的直径、形状、质地的均匀度、色泽；透明带的完整性；卵丘细胞围绕卵母细胞的完整性、数量、扩散程度、色泽。 一般分为4级，1、2级为合格；3、4级为不合格。;一级：卵母细胞：直径120μm，圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞数层、紧密、完整， 质地均匀。 二级：卵母细胞：直径120μm，圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞数层、紧密，但不完 整，质地均匀。 三级：卵母细胞：直径太大或太小，椭圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞单层或无、不紧密、