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巴氏染色原理及操作步骤 巴氏染色 法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，细胞核内的染 色质主要是去氧核糖核酸（ DNA）,DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外， 带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而 被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 分化：苏木素 染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和 细胞浆中吸附的染料必须用分化液 1%盐酸酒精脱去， 才能保证细胞核和细胞浆染 色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使 色素与组织解离，分化不可过度。 蓝化 ：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色 离子状态，在碱性条件下处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗去 酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称 蓝化 作用，一 般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水（ 50 度温水最佳）变蓝。 EA50染液的 酸碱度对于 巴氏染色 的成功起着关键作用， EA50染液由伊红、 亮绿、等染料配成。 伊红、亮绿、橘黄等属于酸性染料，在溶解媒中其发色团是负离子部分，发色团 可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而是胞浆显蓝色、绿色、橘黄色或红色，但 蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的 PH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质 的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷 钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂 还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分化及 蓝化 时可能留下的少量 酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道 脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分 色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点。 巴氏染色 法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞 质染绿色， 表层不全角化细胞胞质染粉红色， 完全角化细胞胞质呈桔黄色； 细菌： 灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬 细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色； 腺癌胞质呈灰蓝色。 巴氏染色的操作方法及注意事项 染色有 4 个步骤： 1、固定； 2 、核染色； 3、胞浆染色； 4 、透明。 主要达到以下要求： 1、核的结构清晰； 2 、透明度高； 3 、分色恰当。 一、固定 固定的目的细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步， 否则会影响 细胞学诊断的准确性。对于不同的标本需要不同的固定方法。最为常用的固 定方法是 95 ％酒精作为固定液的湿固定法。 酒精作为一种脱水剂能够防止细 胞内的酶捋蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类 等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易 于着色。对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。如果酒精浓度不足引起 的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。 1、固定方法湿固定法 ：作为用 95 ％酒精固定液固定的细胞学标本一定 使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有 95 ％ 酒精的固定缸内。 制片在固定液内至少保持 15-30min 。固定时间通常不超过 1 周。这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。如果细胞制片需要送至另一 实验室或邮寄他处染色时，可以固定 15min 后，把制片取出后立即密封的容 器中或者