基因工程原理与技术.pptVIP

基因工程原理与技术;二、用于构建基因组文库载体 ;2、黏粒载体 ;3、酵母人工染色体载体 ;三、基因组文库构建程序 1、基因组DNA克隆片段制备 ①高分子量基因组DNA提取 ②DNA克隆片段制备 ;3、基因组DNA片段与载体连接(重组DNA分子构建) 连接效率关键受插入片段与载体摩尔数比以及DNA片段总浓度影响。所以, 应经过连接预试验确定连接反应中载体臂和插入片段用量。 ;4、重组DNA分子导入受体细胞 对于λ噬菌体载体、黏粒载体, 重组DNA分子在体外包装成噬菌体颗粒, 以噬菌体感染方法??重组DNA分子导入到大肠杆菌中。效率高, 达1.8×108pfu/μg DNA。 对于YAC载体, 采取电激法导入重组DNA分子。 5、转化体筛选培养及基因组文库取得 6、基因组文库扩增、分装及保留 基因组文库扩增方法: 液体培养增殖法、影印滤膜培养法。 基因组文库扩增问题: 因为克隆不均衡生长, 从而造成对应克隆丢失, 造成基因组文库代表性变差。 小包装保留, 4℃保留六个月、-80℃保留几年而滴度保持稳定。 ;第二节 cDNA 文库构建 cDNA文库是指某生物、组织或细胞全部cDNA克隆群体。包含组织特异性cDNA文库、区域特异性cDNA文库。 一、用于构建cDNA文