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B.分光光度计的类型 第三十页，共53页 双光束光度计动画示意 第三十一页，共53页 双波长光度计光路示意图 第三十二页，共53页 单波长单光束分光光度计有国产751型、XG-125型、英国SP500型和伯克曼DU-8型等。 单波长双光束分光光度计有国产710型、730型、740型、日立UV-340型等就属于这种类型。 双波长分光光度计的优点：是可以在有背景干忧或共存组分吸收干忧的情况下对某组分进行定量测定。 国产WFZ800-5型、岛津UV-260型、UV-265型等。 第三十三页，共53页 4.5 分光光度法的应用 2.5.1 定性鉴定 2.5.2 定量测定微量成份 分光光度法被广泛的应用在各个领域，环境、医药、石油等测定无机、有机微量成份。由于操作简单，仪器廉价，一般说是常用的首选方法。 第三十四页，共53页 4.6 紫外吸收光谱分析法 4.6.1 分子吸收光谱与电子跃迁 分子和原子一样，也有它的特征分子能级 。分子内部的运动可分为价电子运动，分子内原子在平衡位置附近的振动和分子绕其重心的转动。因此分子具有电子能级、振动能级和转动能级。 分子的能量 E 等于下列三项之和： E=Ee+Ev+Er 分子从外界吸收能量后，就能引起分子能级的跃迁，即从基态能级跃迁到激发态能级。分子吸收能量具有量子化的特征，即分子只能吸收等于两个能级之差的能量： ΔE=E2-E1=hυ=hc/λ 电子能级 转动能级 振动能级 第三十五页，共53页 4.6紫外吸收光谱分析法 波长10～400nm为紫外光，10～200nm为远紫外光，200～400nm为近紫外光。 4.6.1 分子吸收光谱与电子跃迁 有机化合物的紫外—可见吸收光谱，是其分子中外层价电子跃迁的结果（三种）σ电子、π电子、n电子。 外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态(反键轨道)跃迁。主要有四种跃迁所需能量ΔΕ大小顺序为n→π＊ π→π＊ n→σ＊ σ→σ＊ 第三十六页，共53页 A.σ→σ* 跃迁主要发生在真空紫外区。 B.π→π* 跃迁吸收的波长较长，孤立的跃迁一般在200nm左右 C. n→π* 跃迁一般在近紫外区（200 － 400 nm），吸光强度较小。 D. n→σ* 跃迁吸收波长仍然在（150 －250nm）范围，因此在紫外区不易观察到这类跃迁。 第三十七页，共53页 4.6.2有机化合物紫外—可见光谱 第三十八页，共53页 仪器分析紫外分光光度仪 第一页，共53页 4.1.1 方法的特点 1. 灵敏度高 通常，待测物质的含量1～10－5％时，能够用分光光度法准确测定。所以它主要用于测定微量组分。 2. 应用广泛 几乎所有的无机离子和许多有机化合物可以用分光光度法进行测定。如土壤中的氮、磷以及植物灰、动物体液中各种微量元素的测定。 第二页，共53页 3. 操作简便、迅速、仪器设备不太复杂 若采用灵敏度高、选择性好的有机显色剂，并加入适当的掩蔽剂，一般不经过分离即可直接进行分光光度法测定、其方法的相对误差通常为5～10％，其准确度虽不及重量分析法和容量法，但对于微量组分的测定，结果还是满意的。 第三页，共53页 4.2.1 颜色的产生 4.2 吸光光度法的基本原理 第四页，共53页 光的波长λ(cm)、频率γ (Hz) ，它们与光速c的关系是： 4.2.2 光的基本性质 在真空介质中，光速为2.9979×1010cm/s。单个光子的能量E与上述三要素的关系是： E－－光子的能量，J；h－－普朗克常数（6.625×10－34J·s） 第五页，共53页 4.2.3 溶液颜色与光吸收的关系 光波是一种电磁波。电磁波包括无线电波、微波、红外光、可见光、紫外光、x射线等。如果按照其频率或波长的大小排列，可见光只是电磁波中一个很小的波段。见表12－1 第六页，共53页 第七页，共53页 有色物质的不同颜色是由于吸收了不同波长的光所致。溶液能选择性地吸收某些波长的光，而让其他波长的光透过，这时溶液呈现出透过光的颜色。透过光的颜色是溶液吸收光的互补色。有色溶液对各种波长的光的吸收情况，常用光吸收曲线来描述。将不同波长的单色光依次通过一定的有色溶液，分别测