实验五 白细胞计数 (1).docxVIP

实验六 白细胞计数（显微镜计数法） 一、实验目的 掌握白细胞计数原理及方法。 二、实验原理 用稀醋酸溶液将血液稀释一定倍数，同时破坏溶解红细胞，白细胞却保留完整的形态，混匀后充入计数池，在显微镜下计数一定体积中的白细胞，经换算得出每升血液中的白细胞数。 三、实验试剂： 2%醋酸：冰醋酸2ml、蒸馏水98ml、10g/L 亚甲蓝溶液3滴。 该溶液为低渗溶液，可溶解红细胞，醋酸可加速其溶解，并能固定核蛋白，使白细胞核显现，便于辨认。 四、实验器材： 改良牛鲍血细胞计数板及盖片、显微镜、试管、一次性微量吸管、一次性采血针、消毒酒精、无菌干棉球干净柔软的纱布、1ml移液管。 五、实验操作： 取小试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。 用微量吸管准确吸取末梢血20μL。 擦去管尖外部余血，将吸管插入盛0.38ml稀释液的试管底部，轻轻吹出血液，并吸取上清液洗刷3次，注意每次不能冲混稀释液，最后用手振摇试管混匀。 充液，将计数池和盖玻片擦净，盖玻片盖在计数池上，再用微量吸管迅速吸取混匀悬液充入计数池中，静置2~3分钟后镜检。 用低倍镜计数四角的4个大方格内的白细胞总数。对于压线的白细胞，应采取数上不数下、数左不数右的原则，保证计数区域的计数结果的一致性和准确性。 计算 【参考值】 【注意事项】 一次性微量吸管、血细胞计数板、1ml移液管的质量符合要求，否则影响计数结果。 【标本】可以是末梢血，也可以是静脉血液（抗凝全血） 吸血量要准确，防止产生气泡、同时必须擦去管外粘附血液。 放血至稀释液时要轻巧，不能打混稀释液，并将管内壁清洗干净，保证加入的血液准确为20μL。 充池时若充液不足、过多外溢、断续充液、或产生气泡、充液后移动盖玻片会导致细胞分布不均匀，各大格间的细胞数若相差10%以上，应用纱布擦掉计数板重新充池。 对于压线细胞按照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。 白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，白细胞分类时若发现较多有核红细胞，则白细胞计数结果应扣除有核红细胞。白细胞实际值=校正前WBC×100/(100＋有核红细胞） 【实验时数】 2学时