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孤核受体 NR4A2 通过肝纤维化中的 MAPK 通路抑制肝星状细胞增殖 摘要： 肝星状细胞 （HSC ）在肝纤维化中起关键作用， 肝纤维化是以细胞外基质积累的病理过程。 NR4A2是属于 NR4A亚科的核受体，在调节细胞生长，代谢，炎症等生物功能至关重要。 然而，它在 HSC 中的作用尚不清楚。 我们对纤维化肝脏中的 NR4A2表达和刺激的 HSCs与对照组作对比， 并研究了 NR4A2 敲除后对细胞增殖，细胞周期，细胞凋亡和 MAPK 通 路的影响。通过实时聚合酶链反应， Western 印 迹，免疫组织化学和免疫荧光分析检测 NR4A2表达。纤维化肝组织和 PDGFBB或 TGF- B 中 NR4A2表达显着降低后刺激的 HSCs 与对照组相比。 NR4A2敲除后 ，a - 平滑肌肌动蛋白和 Coll 表达增加。此外， NR4A2沉默 促进细胞增殖， S 期的细胞 百分比增加， HSCs 中 ERK1 / 2 ， P38 和 JNK 的磷酸化水平降 低。这些结果表明 NR4A2 可通过 MAPK 通路抑制 HSC 增殖，并减少肝纤维发生中的细胞 外基质。 NR4A2 可能是治疗肝纤维化的治疗靶点。 关键词：纤维化，肝星状细胞， MAPK ， NR4A2 ，增殖 介绍 肝纤维化是细胞外基质积累为特征的病理过程。它可能由炎症，药物， 酒精， 病毒和胆汁郁 积引起。 许多细胞如内皮细胞， 肝星状细胞 （ HSC ）和枯否细胞参与肝纤维发生。 其中 HSCs 起着 关键作用，是细胞外基质的主要细胞来源。 HSC，也称为贮脂细胞或窦周细胞，及在 肝脏的窦周隙中发现的周细胞。当肝脏受损时，静息状态的 HSC 细胞被活化。 MAPK/ 细胞外调节激酶 (ERK ) 途径对 HSC的活化起十分重要的作用。 最近在动物模型 中证明肝纤维化是可逆的。然而，一些机制还仍然不知道。 NR4A亚家族的报道越来越多。 NR4A家族广泛分布在调节分化中，增殖和凋亡的细胞，并 且涉及许多疾病如癌症， 血管硬化和代谢综合征。 NR4A成员都有高度保守的细胞区域： 可 变的氨基末端区域，中心的 DNA 结合区域在可变且连续的 D 区域， DBD连接到羧基末端 保守 E / F 区域的。 NR4A是早期反应基因，作为转录因子。 Palumbo-Zerr 等人观察到 NR4A1 招募限制 TGF- B 导致纤维化的阻遏物。 TGF- B 的持续激活抑制 NR4A1在纤维化疾病中的 表达。 yin 等发现，在 子宫肌瘤中 NA4A1 , NR4A2 和 NR4A3的表达显着下降。肝脏疾病 中 NR4A的研究很少。可以肯定的是， HSCs中 ERK1的下调显着减弱了纤维化肝脏细胞 外基质沉积。 ERK5 / MAPK与 NR4A2组合导致转录活性升高。另外， NR4A2被鉴定为 ERK2 的靶标。总 之， NR4A2可能调节肝纤维化中的 HSC。 在本文中，我们证实 NR4A2的表达在纤维化肝组织和 PDGFBB或 TGF- B 刺激的 HSC中 显着降低。 NR4A2 沉默导致 a 平滑肌肌动蛋白表达量更多，促进细胞增殖和增加 S 期细胞 百分比以及降低 ERK1 / 2 , P38 和 JNK在 HSC中的磷酸化。因此， NR4A2可能是抗纤维 化治疗的潜 在靶点。 材料与方法 抗体和试剂 来自圣克鲁斯 (Santa Cruz ) 的抗甘油脱水磷酸脱氢酶 ( GAPDH ) (SC-25778 ), NR4A1 (SC-5569 ), NR4A2 (SC-991 ) , NR4A3 (SC-30154 ) 和 a -SMA (SC-32251 ) CA , USA ) o Alexa 氟？ 546 IgG 抗体 (A10040 ) 和 Alexa Fluor ? 488 的 lgG( H + L ) 抗体 (A21202 ) 得自 Life Technologies (Carlsbad , CA , USA ) 。来自 LI-COR Biosciences (Lincoln , NE , USA ) 的 IRDye680 抗兔抗体 (926-32221 ) 和 IRDye680 抗小鼠抗体 (926-32220 ) 。来自 Cell Signaling ( Danvers , MA) 的 Erk1 / 2 (4695P ), P-erk1 / 2 (4370P ), JNK ( 9258P ), P-JNK (4668P ), P-P38 (4511P ) 和 P38 ( 8690P ), 美国 ) 。Nycode nz (QK1002424-1 ) 来自 Nycomed ( 瑞士苏黎世 ) 。 NC 硝化纤维素来自 Pall(Po