CR检测技术的分析前质量控制PPT课件.ppt

临床PCR实验室标本拒收记录（二） 姓名 性别 病历号 采集时间 接收时间 标本类别 拒收原因 拒收人签字 送检人签字 □男 □女 月 日 时 月 日 时 □全血 □ □正常 □ 标本拒收原因： （1）患者姓名或病历号不符 （2）标本容器为非不含任何添加剂的真空采血管 （3）采血量低于2ml （4）标本采用肝素抗凝 （5）容器破损 （6）标本采集后送检时间超时 （7）标本重度或中度溶血 （8）标本脂血 （9）标本类型不正确 （10）其它： 标本的处理和保存 血清（浆） 最理想的做法：分离血清（浆）时，分出两管，一管用于测定，一管用于长期保存备查。 HBV：分离出的血清（浆）如不立即提取核酸，保存于-20℃待检。 HCV：尽快分离血清(浆), 如不立即提取RNA， 保存于-20℃待检。 RNA长期保存：吸取200μl血清，加20u RNasin（RNA酶抑制剂），保存于-70℃。 如不分管，已发出结果报告的标本应及时转移至冰箱保存，并由专人负责管理，保存1-2周（时间长短根据报告单上的承诺而定）。 标本的处理和保存 全血标本 全血标本如用于DNA提取，可4℃下短期保存（数天），时间长易降解，如用于RNA检测，应在取血后尽快提取RNA。 最好将DNA或RNA提取后，置-70℃保存。 标本的处理和保存 外周血单个核细胞 用淋巴细胞分离液分离单个核细胞。 加红细胞裂解液裂解残余红细胞，生理盐水洗涤数次离心取沉淀。 如短期内不提取核酸，置-70℃保存。 标本的处理和保存 淋巴细胞分离液分离单个核细胞 标本的处理和保存 外周血单个核细胞 有研究表明，HCV-RNA和HGV-RNA的丰度外周血单个核细胞高于血浆。 病毒感染外周血单个核细胞后并在其中复制，然后释放入血浆，因此检测细胞内病毒RNA比检测血浆更有价值。 标本的处理和保存 痰液 由于痰标本中含大量粘蛋白和杂质，故在核酸提取时，一定要对标本进行前处理，即用4%NaOH液化，去除粘蛋白。 液化的痰标本如不立即用于核酸提取，可保存于-20℃。 处理后的棉拭子、体液、脓液如不立即用于核酸提取，可保存于-20℃。 标本的处理和保存 棉拭子 将棉拭子置于适量生理盐水中,充分震荡洗涤后,室温静置5～10分钟,待大块状物下沉后,取上清立即离心,其后的沉淀即可用于DNA提取。 如不立即用于核酸提取,则需保存于-70℃下。 标本的处理和保存 脓液 脓液的处理依情况而定,如用于分枝杆菌(如结核杆菌)核酸测定的标本,粘稠的脓液可采用痰标本的处理模式，先进行液化，再离心取沉淀提取DNA；水样的脓液则直接离心,沉淀用生理盐水洗2～3次后,即可用于DNA提取。 对于用于非分枝杆菌测定的脓液标本,如过于粘稠,则加入适量生理盐水,充分振荡后,静置,取上清立即离心,沉淀用于DNA提取;如为水样,则按上述直接离心取沉淀即可。 沉淀标本的保存条件同样为-70℃。 标本的处理和保存 组织 新鲜组织最好保存于50%乙醇中，具体方法：先用生理盐水将组织洗一次，切成小块，加入适量生理盐水，然后边摇边加入无水乙醇至终浓度为50%，这样固定的组织标本室温下可保存数日，4℃可保存6年。 谢谢关注 分析前质量管理的内涵 ISO/IEC 15189对于分析前程序的明确定义： 按照时间顺序，从临床医生开出医嘱开始，到分析检验程序时终止的步骤，包括检验申请、患者的准备、原始样品的采集、运送到实验室并在实验室进行传输。 这个过程大部分工作都是医生、护士、护工等在实验室以外完成的。 分析后质量评估 分析中质量控制 患者准备 检查患者申请检验 标本采集 标本运送 标本处理 人员素质 工作环境 实验用水 实验室管理 仪器质量保证 方法选择与评价 试剂选择与评价 建立操作规程 室内质控及分析 标本分析测定 临床医师 反馈信息 室内复查 保留标本随时复查 运送报告患者投诉室间质评 登记 填发报告 分析前质量保证 分析中质量控制 分析前程序的特点 分析前阶段所占时间比例大。 分析前程序的特点 分析前质量管理是最易出现问题、涉及人员最多、潜在因素最多、最难控制的环节。 发生在临床实验室的错误分析 Analytical factors % of total errors pre-analytical factors 46–68.2 post-analytical factors 18.5–47 intra-analytical factors 15 Mario Plebani. Errors in clinical laboratories or errors in laboratory