第五章海洋动物的细胞操作PPT课件.ppt

第五章 海洋动物的细胞操作 第一节 概论 一、定义： 细胞操作（或细胞工程）:利用细胞融合和显微操作等方法对生物体的基本单位-细胞(包括体细胞和生殖细胞)直接用手操作,创造出对人类有价值的物质和生命体的技术。 包括细胞融合技术、细胞器移植、染色体工程和组织培养技术。 细胞操作、染色体操作以及基因操作的关系密切，有时统称细胞操作。 细胞融合（cell fusion）又称细胞杂交（cell hybridization）。它是指用人工方法使2种或2种以上的体细胞合并形成一个细胞，不经过有性生殖过程而得到杂种细胞的方法。 在自然情况下，体内或体外培养细胞间所发生的融合，称为自然融合。 而在体外用人工方法（使用融合诱导因子）促使相同或不同的细胞间发生融合，称为人工诱导融合。 二、细胞工程的优势 细胞工程的优势在于避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将细胞遗传物质直接转移到受体细胞中就能够形成杂交细胞，因而能够提高基因的转移效率。 三、细胞操作意义 通过细胞融合技术，可以培育出新物种，打破了传统的只有同种生物杂交的限制，实现种间的杂交。这项技术不仅可以把不同种类或者不同来源的植物细胞或者动物细胞进行融合，还可以把动物细胞与植物细胞融合在一起。这对创造新的动、植物和微生物品种具有前所未有的重大意义。 四、细胞操作的基本手段 包括增殖(通过培养) 分离(包括分割） 混合(包括融合) 移植(包括注入) 1、体细胞及配子的制备 (1)细胞制备：除游离细胞(血球)外，在进行体细胞分离时，要将组织切碎，用无Ca2+和无Mg2+的盐溶液清洗，然后，再用胰蛋白酶或胶原酶消化，使细胞分离。 (2)培养和维持： 体细胞的保存 精子的保存：特定的盐溶液或冷冻法保存 卵子的保存：采集后立刻受精 受精卵可在海水或淡水中发育 2、卵和早期胚胎的细胞操作的前处理 （1）卵膜的去除：不管是未受精卵还是受精卵，一接触水即吸水，卵膜和卵的表面分离，很容易用镊子剥去，也可用蛋白酶消化除去。 所使用的酶有蛋白酶、木瓜酶、枯草溶菌素胰酶制剂等。不同的鱼类，其卵膜消化的时间有长有短。 （2）无膜卵的培养：除去卵膜的卵(裸卵)抵抗物理冲击能力很弱，所以应尽可能不要移动它 。 将裸卵放在有冻粉或角蛋白涂层的器皿里也能减少裸卵的损伤。 （3）卵膜硬化的抑制：虹蹲卵受精后在1mmol/L还原型谷光甘肽水溶液(PH8.0)中吸水,可以阻止卵膜蛋白质的—s—s—键形成的卵膜硬化。 受精后已经硬化的卵膜可用尖刀或手术刀切开或用微型打孔器在膜上开孔。 五、海洋动物细胞操作特点 1、海洋动物自诞生以来，就生存在环境相对稳定的海洋中，从无脊椎动物到低等脊椎动物(鱼类)种类繁多。 2、海洋动物与陆生动物相比，其体制比较原始。多数配子(卵子和精于)排到体外(水中)受精，再发育成为个体。 3、海洋生物具有多样性的特点，并且取材容易。 六、研究方向 1、性别控制:性别控制是通过人为地干预并按人们的愿望使雌性动物繁殖出所需性别后代的一种繁殖技术。 可以通过人工授精或体外授精将分离的优良精子注入受体，精子的分离可通过物理、免疫、流动细胞等分离方法进行分离。授精后，可通过胚胎性别鉴定，如染色质、染色体组型鉴定法、雄性特异抗原鉴定或分子生物学SRY-PCR鉴定。 2、嵌合体： 嵌合体是由两个遗传上不同的细胞混合起来组成的生物体。可以作为一种研究用动物、用来探索动物的免疫宽容度、杂种优势和细胞谱系等，在理论研究上具有重要意义。 在海洋动物产业的物种方面，能扩大遗传因子的范围，培育山适应环境变化的个体，即使在不能形成杂种的种类间，也可获得具有双亲优良品质的物种。获得嵌合体有多种方法，比较实用的方法是基因导入法，又称基因工程。 我国朱作言等(]985，1986，]989)利用显微注射法将人生长激素基因先后转移到金鱼、泥锹、鲤鱼和鲫鱼中，培育出多种转基因鱼。 英国人把老鼠生长激素基因注入虹蹲受精卵，培育出生长快、个体大的超级虹蹲。 2021-11-20 23 可编辑 第二节 性决定(性别控制) 一、海洋动物性别决定的特点 1、性染色体缺少或处于进化的初始阶段：海洋动物一般缺乏性染色体或性染色体处于进化的初级阶段，不少种类性别受多基因影响，这些基因往往分布于不同的染色体上。 2、表型性别容易改变，海洋动物的性别容易改变，有些海洋动物的性别在很大程度上受环境条件影响，有的其至完全取决于环境。如牡蛎,黑鲷 鱼类的原始生殖上皮组织，同时具有决定向雌性发育的皮质部分和决定向雄性发育的髓质部分的两个组织部分。在雌性激素作用下，皮质部分会分化为卵巢，髓质部分不发育而呈雌性具有产卵生殖功能；反之，在雄性激素作用下，鱼会变成雄性的。所以，鱼类性别分化具有相当大的可塑性，完全可以按人们的要求，促进鱼类性别的转化，获得