实验一凝胶过滤层析分离蛋白质.ppt

生物化学与分子生物学实验;实验课要求 试剂用后及时归位 及时记录实验结果 按时完成实验报告 离开时做好清洁工作;实验报告的书写;实验基本操作;实验一 凝胶过滤层析法分离蛋白质;二、 实验原理;2. 层析技术（色谱技术）;（1）层析系统的基本组成;待分离混合物（A、B）随流动相通过固定相;（2）层析法的分类; 按层析原理分类 ; 按操作形式不同分类 ;（3）层析技术的优点;3. 凝胶过滤层析法（gel filtration chromatography）;;（2）凝胶的特点;（3）凝胶的选择;Sephadex G-50： 对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 1500 – 30000 Sephadex G-200： 对多肽及蛋白质的筛分范围(分子量)为: 5000 – 80000;B. 琼脂糖凝胶 ( 商品名: Sepharose , Bio- gel – A ) 对实验条件要求高 ( 温度, pH ) ＜40℃ 4.5- 9.0 工作的下限是葡聚糖凝胶工作的上限, 用于大分子物质的分离;C. 聚丙烯酰胺凝胶 商品名: Bio – gel – P（生物胶P）;三、实验操作;2. 凝胶选择、制备;制备： 将干胶颗粒悬浮于5 ~ 10倍的蒸馏水或洗脱液中 充分溶胀，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去;3. 凝胶装柱;注意点：;4. 平衡;5. 加样;6. 洗脱;缩二脲反应 （双缩脲反应）;四、实验结果