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50
实验四 病毒感染力的滴定（ TCID 的测定）
一、实验目的
了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量 TCID
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的操作步骤、计算方法及含义。
二、测定病毒感染力的方法
半数致死量 LD50( 50% lethal dose) ：用动物或鸡胚来检测
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半数鸡胚感染量 EID (egg 50% infective dose) ：用鸡胚来检测
半数细胞培养物感染量 TCID50 （50% tissue culture infective dose) ：用细胞
来检测
蚀斑形成单位（ plaque forming unit ，PFU）：用细胞来检测
三、材料
1、长满单层的细胞 1 瓶
2、胰酶、吸球、吸管、生长液
3、96 孔细胞培养板
4 、加样器、枪头
5、病毒液（ PRV）
四、TCID50 的操作步骤
-1 -10
1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续 10 倍的稀释，从 10 -10 。
2、将稀释好的病毒接种到 96 孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共 8 孔，
每孔接种 100 μl 。
5
3、在每孔加入细胞悬液 100 μl ，使细胞量达到 2~3×10 个/ml 。
4 、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。 （100 μl 生长液 +100 μl 细胞悬液）
5、逐日观察并记录结果，一般需要观察 5-7 天。
6、结果的计算，按 Reed-Muench两氏法或 Karber 法
五、 TCID 的计算方法
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1、Reed-Muench两氏法
出现 CPE 累 计 出现 CPE孔所
病毒液稀释度 无 CPE孔数
孔数 CPE孔数 无 CPE孔数 占的%
-1
10 8 0 27 0 100 （27/27 ）
-2
10 8 0 19 0 100 （19/19 ）
-3
10 7 1 11 1 91.6 （11/12 ）
-4
10 3 5 4 6 40 （4/10 ）
-5
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