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生物化学和分子生物学课程教学大纲 生物化学和分子生物学课程教学大纲 PAGE 生物化学和分子生物学课程教学大纲 《生物化学》和《分子生物学》课程实验教学大纲 课 程 名 称：生物化学与分子生物学实验技术 英 文 名 称：Experiment Technology of Biochemistry and Molecular Biology 课 程 编 号： 实 验 课 性 质：必修 课 程 负 责 人：崔 行 开放实验项目数：3 一、学时、学分 课程总学时：70 课程总学分： 二、适用专业及年级 本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理、预防医学七年制学生。 三、实验教学目的与基本要求 掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构和功能。掌握各种生物物质能量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。通过实验掌握基本的生物化学实验技术及验证部分课堂理论知识。 在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、蛋白质及分子生物学等技术。掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。掌握紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及注意事项。 四、主要仪器设备 紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。 五、实验课程内容和学时分配 序 号 实验项目 名 称 实 验 内 容 学时分配 实验属性 实验 类型 每组人数 实验要求 指导教师 已开/未开 1 1．可见分光光度技术 2．蛋白质含量测定 1．掌握朗伯-比尔定律。2．掌握比色定量分析标准曲线的制备。3.熟悉可见分光光度计的使用。 5 设计 基础 2 必做 已开 2 紫外分光光度法测定蛋白质含量 掌握紫外分光光度计的使用方法 2 综合 基础 2 必做 已开 3 层析技术，蛋白质的分离纯化与鉴定 1.熟悉层析技术的原理、分类及应用范围。2.掌握凝胶层析的基本原理、特点和应用。用SephadexG25脱盐法和用离子交换剂进行蛋白质的纯化。3.学习盐析的方法，用醋酸纤维素薄膜电泳法进行蛋白质的鉴定。 7 设计 基础 2 必做 已开 4 离心技术， 核酸的分离纯化及含量测定 1．熟悉离心技术的基本原理。掌握离心力及其作用。掌握常用离心机使用方法和注意事项。2.学习核酸的分离及生物学特性，了解RNA、DNA的提取和含量测定方法。 7 综合 基础 2 必做 已开 5 酶的提取及比活性测定 1．掌握酶提取纯化的方法和技术以及应注意的问题。2.了解测定碱性磷酸酶活性的原理和方法。3.掌握紫外分光光度计的使用方法。4.了解蛋白质测定在医学中的应用。 7 综合 基础 2 必做 已开 6 底物浓度对酶促反应速度的影响 本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其Km值。 2 验证 基础 2 必做 已开 7 pH对酶促反应速度的影响 本实验以磷酸苯二钠为底物，在不同pH值的甘氨酸缓冲液条件下，测定碱性磷酸酶的活性，从而确定其最适pH值。 2 验证 基础 2 必做 已开 8 温度对酶促反应速度的影响 本实验以碱性磷酸酶为例，在不同温度下保温一定时间，观察酶活性的差别。 2 验证 基础 2 必做 已开 9 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血LDH同工酶 掌握电泳分离同工酶的方法并了解其原理，了解显色原理，了解血清乳酸脱氢酶同工酶电泳分离的临床意义。 5 综合 基础 2 必做 已开 10 胰岛素对血糖含量的影响及测定 1．熟悉激素对血糖含量的影响因素。2.学习邻甲苯法测定血糖的原理，了解测定血糖的方法。 综合 基础 2 必做 已开 11 糖酵解中间产物的鉴定 1．复习糖酵解的主要中间步骤及其产物，2.了解一碘醋酸对3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用。 验证 基础 2 必做 已开 12 氨基转换作用GPT测定 掌握血清谷丙转氨酶活性测定的方法及临床意义 1 验证 基础 2 必做 已开 13 血清尿素氮测定 学习尿素测定的方法。 1 验证 基础 2 必做 已开 14 血清脂类薄层层析 1．学习脂类薄层层析法的具体操作。2．了解薄层层析在脂类成份分析及脂代谢研究中的用途。 1 综合 基础 2 必做 已开 15 电泳技术， 血浆脂