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cy 染料小动物活体成像操作流程 2017/4/13 吲哚花菁绿 (ICG ，indocyanine green)是经过 FDA 认证的菁染料，出于安全考虑，后 期应用于活体（人、动物、细胞）的染料在结构上都和 ICG 有相似或相近之处。 cy 系列 染料是 Amersham 公司 （目前为GE 公司）最初开发的染料体系， 它的桥环由苯并吲哚变 为吲哚环，并在吲哚的苯环上对称地引入硫酸根基团，水溶性得到很大改善，分子量降 低后对大分子的亲和力有所增加。 cy 系列菁染料多带有羟基琥珀酰亚胺活性酯 (NHS ester)、异硫氰酸酯 (NCS)等活性基团，可与蛋白质、多肽、 DNA 或其他生物分子中的羟 基、氨基或巯基以化学键的方式键合，表征生物分子的特性，形成具有生物功能的标记 衍生物，广泛被用于抗体、多肽、小分子等多种荧光探针的合成中，可以说是目前使用 最为广泛的一类近红外染料。 cy 染料应选择 GE、李记生物等公司产品，化工企业提供 的 cy 染料产品，一般不作为活体成像使用。 一、 Cy 染料在活体成像的应用领域 1. 标记特异性抗体 在 CY 菁染料标记蛋白的研究中，除了牛血清白蛋白以外最先开始涉及的功能性物质是 抗 体 。 从 起初 与 IgG 结 合 ， 用 荧光 光纤 免 疫 传 感器 (FFOI ，fluorescent fiber-optic immunosensor)考察抗原抗体反应，到现在连接特异性的单克隆抗体片段，对动物全身进 行免疫荧光显影， 分析片段在体内的分布代谢情况。 分析 cy-抗体复合物在不同时间不同 器官中的荧光强度变化，可对抗体的靶向性、清除率等有更直观的评价。不过，染料抗 体衍生物在降低背景噪音和非特异性吸附方面还有待进一步完善。 2. 标记特异性多肽 (Conjugating to peptides) 在肿瘤诊断和治疗中，与菁染料衍生物结合的多肽主要有两种：其一是针对肿瘤表面过 量表达的受体；另一种则针对肿瘤相关酶类。前者的报道很多，如生长激素抑制素、表 皮生长因子，甚至一些特殊设计过的短肽，都可以被用来靶向结合肿瘤，现在更趋向于 一些只有十几个氨基酸的环肽，因为它分子量小易于接近肿瘤部位，且呈环状构形不易 被分解。 Cy 系列染料均能利用自身携带的活性基团直接与环肽结合，部分此类探针检测 发现，在近红外光学显影和放射显影在浅表的分辨率相似，但在深层组织中前者的信噪 比更高。针对酶类研究一般是设计酶特异性荧光探针， 这种与 Cy 系列染料结合的检测技 术除了在体内定位时有显着优势外，亦可作为体外检测手段与一些常用技术结合，辅助 确定组织中该酶的存在。 3. 与药物载体结合 (Conjugating to drug carriers) 现在生物可降解的、靶向性高的载体是药学制剂领域的一个研究热点，而近红外染料为 研究这些载体的体内行为提供了一种新思路。这些载体主体一般是由多聚谷氨酸、 PGC 等多聚物组成的骨架，骨架侧链上有很多活性基团，可以同时连接上数个靶向功能模块 和染料分子， 所以在装载药物之前就可以先利用荧光显影对该载体的靶向性等作出评价。 这个领域的报道比较少，现在多选用结构较小的单克隆抗体片段或叶酸这些小分子作为 药物载体上的靶向模块与 Cy 系列染料、 ICG 衍生物等结合， 进一步完善对这些载体的研 究可以为疾病确定和定位给药带来新的希望。 二、 cy 染料活化基团的选择 依需要标记的抗原、抗体、酶、多肽等分子所带的可标记基团的种类（氨基、醛基或巯 基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化染料和反应条件。为减少空间位阻影响，可在 cy 染料与被标记物之间加入交联臂结构。常见抗体、抗原、酶、多肽对应的染料活化基 团如下： 1.标记氨基的活化基团： NHS ester (N-羟基丁二酰亚胺酯 ) 。 2.标记醛基的活化基团： Hydrazide 酰肼。多的用于神经元细胞的电极失踪和神经缝隙连 接研究 3.标记巯基的活化基团：