结核病实验室诊断.ppt

Face the problem and find the best solution 谢谢聆听 谢谢聆听 结核分枝杆菌体外药敏试验 1 2 3 4 挑取菌落 磨菌、稀释 接种菌液 孵育7-10天 显色， 读取结果 结核分枝杆菌液体微量药敏 结核分枝杆菌体外药敏试验 结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验 收集我院2015年8月至11月的临床分离菌株511例，使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的体外药敏试验 。其中MDR-TB菌株75例（14.7%）。 药物 RFP INH SM EMB CPM OFX ETH PAS LVF MOF RFB AMI KAN CLO 耐药 例数 80 146 94 58 50 61 41 49 53 62 60 11 13 87 耐药率% 15.7 28.6 18.4 11.4 9.8 11.9 8.0 9.6 10.4 12.1 11.7 2.2 2.5 17.0 结核分枝杆菌体外药敏试验 结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验比对实验 收集临床分离菌株和国家参比室的质控菌株117例，使用液体微量显色法和罗氏比例法进行了利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺、对氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、 利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、 氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的比对实验。 总符合率超过90%。 结核病分子生物学诊断 一、结核分枝杆菌探针溶解曲线技术 结核病分子生物学诊断 结 果 判 断 结核病分子生物学诊断 溶解曲线法 比例法药敏 敏感度 特异度 阳 性 预测值% 阴 性 预测值% 总符 合率% 敏 感 耐 药 % % INH 敏 感 110 4 90.5 98.2 95.5 96.6 96.1 耐 药 2 38 RFP 敏 感 103 2 95.8 97.2 94.1 98.1 96.8 耐 药 3 46 收集我院样本库的临床分离菌株154例，进行了溶解曲线法耐药基因突变分析以及罗氏比例法药敏试验，总符合率在96%以上。并对耐药结果不相符的11株菌进行了基因测序分析，均证实有耐药基因突变。 结核病分子生物学诊断 二、结核分枝杆菌RNA检测(TB-RNA) RNA作为临床分子诊断靶标的优点： RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数 更具临床意义: 生命力旺盛的病原体RNA转录活跃 RNA远不如DNA稳定，病原体死亡，RNA很快降解 1.交叉污染少 2.较好的愈后指标 结核病分子生物学诊断 统计今年我院住院患者179例，分析涂片、培养和TB-RNA检测报告，结果如下： 患者类型 例数 TB-RNA 阳性例数 阳性率 涂片阳性 27 23 85.2% 涂片阴性 142 41 28.9% 培养阳性 68 62 91.1% 培养阴性 111 2 1.8% 我院涂片、培养阳性率分别为：15.1%和37.9%；TB-RNA的总阳性率为35.8%。 结核病分子生物学诊断 三、EasyNAT TB-DNA检测（恒温扩增法） 原理：将病原体DNA扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种技术有机地融为一体，在恒温扩增反应中加入两对TB特异性引物、一对特异性探针，同时 一次性完成TB DNA的扩增及杂交 过程，然后用一次性核酸检测装 置进行定性诊断。 检测目标片段:目标为结核分枝杆菌 特异性IS6110片段。 结核病分子生物学诊断 操作步骤 结核病分子生物学诊断 2015年6月，我科参加CTCTC“EasyNAT?结核分枝杆菌核酸检测试剂盒现场应用评估”项目,结果如下： 患者类型 例数 EasyNAT TB-DNA检测 阳性率 % 阳性 阴性 涂片阳性 7 7 0 100.0 涂片阴性 43 2 41 4.7 培养阳性 10 9 1* 90.0 培养阴性 40 0 40 0.0 注*：1例培养阳性最终鉴定为非结核分枝杆菌 结核病分子生物学诊断 四、Gen-Xpert MTB/RIF 进行标本处理、实时PCR和利福平耐药性检测的完整平台 痰标本可以直接放入模块中，而无需与任何试剂进行混合处理 GeneXpert 设备可进行标本液化、去污染、富集、DNA提取、 rpoB实时扩增、应用分子灯塔检测耐药相关的突变 容易使用，不需要进行分子生物学培训 操作完全自动化， 使用起来既容易又安全。 结核病分子生物学诊断 Xpert MTB/RIF与PCR TB-DNA检测的比较： 阳性符合率＝99.03％，阴性符合率＝92.61％，总符合率＝95.