化妆品微生物.ppt

* (二) 微生物限度检查 1．微生物限度检查的概念与意义:是指非规定灭菌制剂及其原料、敷料受到微生物污染程度的一种检查法。 这类药品一般不要求绝对无菌，允许一定限量的微生物存在，但不得存在可疑致病菌。 微生物限度检查是体现药品卫生质量的一个重要依据。药品污染的微生物量反映了药品的卫生质量，药品中污染的微生物越多，存在致病微生物的可能性就越大，药品质量和用药安全性也就越无法保证。 * 微生物限度检查也是药品生产企业管理和质量体系评审的一个重要手段，反映药品生产工艺的科学性、合理性和质量管理水平。卫生工艺条件差、质量管理水平低的生产单位，其生产药品的染菌量必然严重。 * 2．微生物限度检查的方法 包括细菌总数、霉菌及酵母菌数和控制菌的检查。 (1)细菌菌落总数、霉菌和酵母菌菌落总数测定：这是检测药品质量的一个重要指标，也是对药品原料、生产工艺、生产环境以及操作人员卫生状况进行卫生学综合评价的依据之一。 按我国药典规定，细菌菌落总数是指每克、每毫升或每10cm2。在需氧条件下，30～35℃培养48h，在肉汤营养琼脂平板上生长的菌落数，记录为菌落形成单位数(colony forming unit，cfu)。 霉菌和酵母菌菌落计数，采用玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉一胨一葡萄糖琼脂为培养基，23～25℃培养48～72h，测定和记录单位同样也是菌落形成单位数。 * (2) 控制菌的检查 非规定灭菌药品中不得检出的菌类称为控制菌。 药品中不允许污染致病微生物，但是致病微生物种类繁多，不可能逐一检验，而是通过分析某种致病微生物存在于某种药品中的可能性，从而选作控制菌。 我国药典选定的药品控制菌有大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和梭菌属。 * 3．微生物限度检查的结果判定 如果供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数以及控制菌三项检测结果符合该品种规定，则判定为供试品符合规定； 如果其中任何一项不符合该品种的规定，则判为供试品不符合规定。 * 控制菌或其他致病菌的检测，按一次检出结果为准，不再复试； 对于供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数，其中任何一项不符合该品种的规定时，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。 * (三）细菌内毒素和热原质的检查 1·细菌内毒素和热原质检查的概念与意义 细菌内毒素是革兰阴性菌细胞壁的组分，是在细菌死亡破裂后释放出的脂多糖成分。 热原质泛指那些能引起机体发热的物质，可分为外源性和内源性热原质。外源性热原质为细菌合成代谢所产生的能导致机体发热反应的物质，主要包括革兰阴性菌内毒素和少数革兰阳性菌分泌的外毒素。内源性热原质则来自机体自身，细菌内毒素可激活机体单核一巨噬细胞和致敏淋巴细胞，使之释放IL-1、INF-α和IFN—β等内源性热原质。 热原质检查法也称为家兔热原试验，是将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内，在规定时间内观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原质的限度是否符合规定。 细菌内毒素检查法也称为鲎试验，是利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的机制，来判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 * 与热原质检查法相比，内毒素检查法具有更高的灵敏度和特异性，而且操作简便。此外，研究表明内毒素活性与药品中热原质的存在具有很高的相关性，而且内毒素检查法与家兔热原试验作为人类发热反应的预测方法也是相关的。 因此，在注射剂GMP生产环境下，不存在内毒素也就意味着不存在主要的热原质物质。鉴于以上原因，目前细菌内毒素检查法已得到广泛应用。 * 2．细菌内毒素和热原质检查的方法 (1)细菌内毒素检查法：鲎试验是一种酶促反应，参与反应的鲎血细胞溶解物的成分是C因子、B因子、G因子、凝固酶原和凝固蛋白质。 1980年美国FDA该试验法可用于检测人用和兽用注射药品的内毒素污染， 1991年《美国药典》22版的增补本删除了众多品种的热原试验，代之以细菌内毒素检查法。 2005年新版《中国药典》对内毒素检查方法进行了全面修订，内毒素检测品种增加到112种，使之与美国、欧盟和日本三方协调统一的方法趋于一致。 (2)热原质检查法：从20世纪20年代开始，众多学者在很多动物上研究热原质的发热反应，认为猴、马、犬、猫和家兔与人类发热反应的本质基本相似，其中家兔对热原质最为敏感，更适用于证明热原质的不存在。 1942年颁布的第12版《美国药典》首次正式收载了家兔热原试验方法，从此为注射用药提供了一个有效和可靠的热原检测手段。 我国1953年编纂的第1版《中国药典》收载了家兔热原检测方法， * 三、药品微生物学标准 根据药品的性质和用途，各国药典所制定的微生物学标准一般分为强制性的(要求无菌)和非强制性的(允许有一定数