氨基糖苷类药残留测定方法（四） .docxVIP

PAGE PAGE 1 氨基糖苷类药残留测定方法（四） 5)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography， HPLC) HPLC常用于难挥发、强极性物质的分别检测，因其专一性强和敏捷度高，在药物检测中得到广泛的应用。AGs水溶性好、极性大且分子量高，特殊适合于采纳HPLC法检测。目前，利用液相色谱检测AGs的办法主要有紫外检测法、荧光检测法、电化学检测法、蒸发光散射检测法、化学发光检测等。A.紫外检测法(ultraviolet detector， UVD)A.紫外检测法(ultraviolet detector，UVD)因为AGs没有特征的紫外汲取生色基团，常按照其分子中的活泼基团(如氨基和羰基)与衍生化试剂反应生成有紫外汲取的物质，再采纳UVD检测。董晓庆等采纳柱前衍生化、HPLCUVD检测鸡组织中链霉素的残留量。用沉淀蛋白质，ODS-C18柱净化，1，1-萘醌-4-磺酸钠(NQS)柱前衍生化反应，HPLC-UVD在252nm检测。流淌相为-醋酸盐缓冲液(pH3.3)-水(10+10+80， v/v)，流速0.3mL/min，柱温35℃。在200ug/mL、100ug/mL、50ug/mL添加浓度，办法回收率分离为75%～90%、70%～86%、64%～75%，CV均小于10%在肌肉、肝脏和肾脏中的LOD分离为120ug/kg、123 ug/kg和218ug/kg。 Feng等建立了一种迅速分析血浆中痕量妥布霉素的HPLC办法。采纳1-异硫代氰酸萘基酯(NITC)与血浆中的妥布霉素在70℃衍生化反应，加入/乙腈溶液消耗掉过量的衍生化试剂，缩短分析时光。衍生物用Purospher STAR RP-18e色谱柱分别，流淌相为乙腈-水(50+50，v/v)，UVD在230nm检测。办法线性范围为0.93～9.34mg/L，LOD可达0.23mg/L，回收率超过99%，日内RSD小于2.1%，日间RSD小于5.2%。FenellI等建立了牛奶和动物组织中庆大霉素的HPLC-UVD测定办法。样品用KH2PO4-Na2SO4溶液(pH8.8)提取，经SPE柱净化后，用(OPA)衍生化，HPLC-UVD在330nm处检测。庆大霉素的4种同分异构体分别良好，出峰位置没有干扰。牛奶和组织中庆大霉素的LOD分离为0.6ug/kg和1ug/kg，CV分离为2.5%和8.1%，回收率超过90%。B.荧光检测法(fluorescence detector， FLD)AGs本身不产生荧光，也需要衍生化反应后，才干采纳FLD检测。陈晓红等报道了蜂蜜中链霉素的HPLC-FLD检测办法。采纳50%三氯乙酸提取，在C18柱上以0.01mol/L1-庚烷磺酸钠+乙腈为流淌相分别，用氢氧化钠和NQS双试剂柱后衍生化，在激发波长263 nm和放射波长447nm下，用FLD检测，获得的回收率为87.9%～93.8%。周萍等建立了蜂王浆中链霉素的残留分析办法。用高氯酸提取，经羧基柱和C18小柱的净化后，HPLC-柱后衍生-FLD检测。流淌相为20%乙腈水溶液加1.1g庚烷磺酸钠和0.052g 1，1-茶-4-磺酸钠，用乙酸调pH3.3；色谱柱为Hypersil ODS2(150mm×4.6mm，4um)；流速1.0mL/min；衍生剂为0.2mol/L NaOH，流速0.4mL/min；柱温50℃，衍生温度50℃；检测波长为λex=263nm，λem=435nm。该办法回收率在74.7%～95.3%之间，办法敏捷度达到了5ug/kg。姜莉等用磷酸溶液提取鲜牛奶中的链霉素，用苯磺酸阳离子交换柱和C18固相萃取柱净化，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解，HPLC分别，柱后衍生，FLD在激发波长263nm和放射波长435nm测定。办法线性范围为0.01～0.10mg/kg，回收率为78.3%～80.2%，CV为7.4%～12.4%；办法LOD为0.005mg/kg。Edder等开发了肉、奶、蜂蜜等动物源食品中链霉素残留的HPLC测定办法。用高氯酸提取动物源食品中的链霉素，阳离子交换和C18柱固相萃取净化，离子对LC分别，NQS柱后衍生化，FLD测定(激发波长为260nm，放射波长为435nm)。蜂蜜、牛奶、肉、肝和肾中的LOD分离为0.005 mg/kg、0.03mg/kg、0.03mg/kg、0.1mg/kg和0.1 mg/kg，LOQ分离为0.01mgkg、0.05mg/kg、0.05mg/kg、0.2mg/kg和0.2mg/kg；办法回收率超过80%。Vinas等采纳离子对HPLC分析了食品中链霉素和双氢链霉素残留。该办法采纳了一种新型的LC色谱固定相(具有酰胺基团和三甲基硅封端