PCR技术用于微生物检测的优缺点 .docxVIP

PAGE PAGE 1 PCR技术用于微生物检测的优缺点 (一) PCR技术用于微生物检测的优点 传统办法检测微生物通常用平板培养法，通过菌落计数来推断菌休浓度。这种办法简单操作，但是通常耗时较长，快者需培养2~3d，慢者需7~10d方能出检测结果。然而， 用PCR技术可以快速、特异性地扩增待检微生物目的DNA片段，很快即可推断某种(类) 微生物在样品中存在与否， 十分迅捷、敏捷。此外， PCR技术可以用来检测那些人工无法培养或难以培养的微生物，从而大大增强诊断检查内容和诊断能力。(二) PCR技术用于微生物检测的缺点PCR技术也存在着一些缺陷， 故尚未能成为一种常规检查办法。目前仍无法彻低取代传统的培养检测法。其缺陷主要体现在以下方面。1.假阳性问题PCR用于微生物检测， 最大问题是核酸污染造成假阳性。PCR具有极高的敏捷度就是造成这个问题的缘由，由于1~100个分子水平上的污染即可使扩增呈阳性。假阳性的造成，主要是扩增产物污染和标本间的交错污染。扩增产物污染既是最严峻， 也是最简单发生的一种污染； 由于经过一次PCR扩增， 可以产生大量的扩增产物，即使最极小的气溶胶微滴(1×10-6uL)，也可含有大量的靶分子。如该气溶胶被带进扩增管内，明显假阳性就产生了。要防止假阳性，主要是做好物理隔离， PCR试验室最少应分为3个区：标本处理区、试剂配制区、扩增及产物检测区，采取扩增前、后隔离操作制；规范试验程序、严守试验室规章。试验中必需每次做阴性对比，以推断是否有污染而造成假阳性。2.假阴性问题假如用于PCR扩增的模板液中带有某种抑制PCR反应的成分， 则有可能使扩增失败而产生假阴性。尤其是食品中成分比较复杂， 食品基质成分抑制PCR反应导致假阴性的状况比较常见。因此，每次试验中也必需同时设立阳性对比以推断是否有抑制成分导致的假阴性。3.定量检测困难PCR法检测微生物， 其结果表现为“有”或“无”， 仅可定性判别， 无法定量分析。定性PCR对推断某种(类) 微生物存在与否很故意义， 如对那些不得检出的微生物等的检测是合适的。但要使结果更具意义， 要能举行量的分析， 明显定性PCR无法胜任。因此， 这也限制了它在微生物检测上更广泛的应用。目前， 对定量PCR已有较多的探讨， 然而， 因为影响PCR产率的因素无数， 举行精准的定量仍有不少闲难。虽然PCR检测有以上的缺陷而使其用法受到一定限制， 然而因其敏捷高、特异性强、迅速简便等特点，已在医学微生物、食品微生物、环境微生物的检测方面得到了广泛应用， 具有常规分别培养法无可比拟的优点。近年来用PCR技术检测微生物的讨论报道与日俱增， 信任PCR会在病原体迅速检测、食品微生物监控等方面发挥越来越大的作用。