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RPHPLC法测定熟地黄中5 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：RPHPLC法测定熟地黄中5 1 1材料和方法 2 文2：正交实验法优选熟地黄中5HMF的提取工艺医学 4 1材料和方法 5 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 RPHPLC法测定熟地黄中5 文1：RPHPLC法测定熟地黄中5 0引言 熟地黄首载于《本草图经》，为玄参科多年生草本植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch的根，经加工炮制而成. 熟地黄在临床上应用较为广泛［1］. 熟地黄含有梓醇、糖类、甙类、5羟甲基糠醛(5HMF)等化学成分，其中5HMF是熟地黄质量控制的量化指标之一［2］. 文献 报道生地黄炮制成熟地黄后5HMF的含量增加20倍左右［3］. 而5HMF对人体横纹肌及内脏有损害［4］；具有神经毒性，能与人体蛋白质结合产生积蓄中毒［5］. 熟地黄中5HMF含量测定报道较少，如薄层扫描法（TLCS）［3，6］. 但TLCS法操作复杂、受试条件重复性差. 我们采用RPHPLC法测定了3种不同产地的生地黄经相同方法加工炮制而成的熟地黄中5HMF的含量，建立了测定熟地黄中5HMF含量的方法. 1材料和方法 材料 DIONEX Summit 680高效液相色谱仪(美国)：P680 HPLC PUMP，Thermostatted Column Compartmemt TCC100, PDA100 Photodiode Array Detector，Chromenleon Chromatography Management System；SK250LH型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）. 5HMF对照品（ 中国 药品生物制品检定所，批号：111626-200301）；熟地黄（西安市药材公司提供，经第四军医大学药物研究所王四旺主任药师鉴定为玄参科多年生草本植物地黄的根炮制而成）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯. 方法 色谱条件色谱柱：ZODBAXC18分析柱（ mm×150 mm,5 μm）；流动相：甲醇- mol/L磷酸溶液(70∶30)；流速： mL/min；柱温：25℃；检测波长：284 nm；进样量：20 μL. 供试品溶液与对照品溶液的制备取本品细粉 g，精密称定，置于25 mL量瓶中,加甲醇20 mL，密塞，超声提取1 h，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，过滤提取液，精密吸取 mL置于25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液. 另精密称取5HMF对照品 mg，加甲醇溶解并定容至25 mL量瓶中，制成 g/L的对照品溶液. 线性关系精密吸取，1，，2， mL对照品溶液，分别置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，用 μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取20 μL进样，测定峰面积. 精密度试验在室温条件下，取质量浓度为 g/L的5HMF对照品溶液连续6次进样，每次20 μL. 稳定性试验取上述制备的供试品溶液，室温放置，在0，1，2，4，6，8 h分别进样20 μL. 重现性试验取熟地药材细粉6份，每份 g，分别置于25 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，依项下方法制备供试品溶液并测定. 加样回收试验精密称定6份已知含量的熟地黄细粉120 mg置于10 mL量瓶中，分别精密加 mg/L的5HMF对照品溶液1 mL，然后加入甲醇7 mL，摇匀，按上述方法制备供试品溶液并测定. 样品测定精密称取3种不同产地的生地黄经相同方法加工炮制而成熟地黄各 g，分别置于25 mL量瓶中, 加入甲醇20 mL，按项下方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定5HMF峰面积. 2结果 以5HMF对照品进样量（μg）为横坐标（X），以测定的5HMF峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线， 计算 得回归方程为：Y=+，r= (n=5，P＜). 结果表明5HMF在～ μg范围内与峰面积呈良好线性关系. 6次重复进样测得5HMF峰面积D为%，表明仪器精密度良好. 稳定性试验测得8 h内5HMF峰面积的D为%，结果表明，5HMF在甲醇溶液中8 h内稳定. 重现性实验中测定的6份熟地药材细粉中，5HMF的平均质量分数为 mg/g，D=%. 加样回收试验测定5HMF的平均回收率为%，D=%. 样品测定，根据测定的5HMF峰面积计算样品中5HMF的含量（表1, 图1）.表1熟地黄中5HMF的含量测定（略） 3讨论 在本实验给定的条件下，基线平稳，出峰时间短，峰型好. 张清波等［6］曾报道HPLC测定熟地黄中5HMF的含量，但我们在其给定的流动相和检测波长下，以ZODBAXC18分析