急性移植肾排斥反应类固醇冲击治疗后淋巴细胞凋亡的作用.docVIP

急性移植肾排斥反应类固醇冲击治疗后淋巴细胞凋亡的作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：急性移植肾排斥反应类固醇冲击治疗后淋巴细胞凋亡的作用 1 1对象和方法 2 文2：穿透性角膜移植排斥反应危险因素分析 5 0　引言 6 1　对象和方法 6 2　结果 7 3　讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 急性移植肾排斥反应类固醇冲击治疗后淋巴细胞凋亡的作用 文1：急性移植肾排斥反应类固醇冲击治疗后淋巴细胞凋亡的作用 0引言 为了探讨同种异体肾移植急性排斥反应(acute rejection, AR)类固醇冲击治疗后细胞凋亡的变化，我们采用原位末端标记法（TUNEL）对患者的移植肾穿刺活检标本中肾小管上皮细胞及浸润淋巴细胞凋亡进行了检测. 1对象和方法 对象试验组为接受尸体肾移植64（男42，女22）例患者，平均年龄34岁. 供者年龄平均26岁. 供受者ABO血型相同，淋巴细胞毒交叉配合试验小于，群体反应抗体（PRA）阴性. 移植后常规采用环孢素A+霉酚酸酯+泼尼松治疗. 急性排斥反应发生于移植后1～6 mo. 急性排斥反应发生前血Cr为(118±17) μmol#12539;L-1，发生中为(411±192) μmol#12539;L-1. 发生急性排斥后连续3 d用甲基强地松龙（第1日500 mg，第2，3日分别为250 mg）冲击治疗. 在冲击治疗后第3日于B超或CT介导下用Menghini或Trucut穿刺针进行移植肾穿刺活检. 对照组选取有淋巴细胞浸润的非排斥反应的移植肾活检标本40(男26，女14)例，平均年龄35岁. 试剂原位细胞凋亡检测试剂盒（in situ cell apoptosis detection kit I，POD），购自武汉博士德公司，地高辛标记的三磷酸脱氧尿苷（DIGDUTP），德国Bochringer Mannheim公司；末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT），美国Promega公司；蛋白酶K、生物素标记的抗地高辛抗体（AntiDIGBiotin），美国Sigma公司. 方法 急性排斥的临床诊断标准① 患者有发热、头昏、倦怠、血压升高、食欲减退、腹胀、并排除明显肺部感染、上呼吸道感染、尿路感染等并发症. ② 移植肾肿大和疼痛. 有局部压痛、质地变硬、体积增大，并排除腹水压迫致移植肾疼痛或输尿管梗阻. ③ 移植肾功能减退. 表现为尿量减少，水、钠潴留，体质量迅速增加，血压升高，血Cr迅速上升,超过原来值的25%，并排除CsA肾毒性. 标本制备活检标本用升汞甲醛液固定10 min后，然后放入Db液中固定. 常规石蜡包埋，切片. 各例切片做常规苏木素伊红（HE）和PAS染色，显微镜观察，进行病理诊断. 实验步骤和判断标准移植肾活检标本石蜡切片常规脱蜡至水体积分数为3 mL#12539;L-1新鲜H2O2处理、蒸馏水洗涤；加Tris缓冲液（TBS）1∶100新鲜稀释蛋白酶K，37℃，10 min，蒸馏水洗；加含TdT和DIGdUTP的标记缓冲液20 μL，37℃，2 h，TBS洗涤；加封闭液50 μL，室温30 min，甩干；加封闭液1∶100稀释的抗地高辛抗体55 μL，37℃，30 min，TBS洗涤；加TBS 1∶100稀释的链霉亲合素生物素过氧化酶复合物（SABC），37℃，30 min，TBS洗涤；DAB显色20 min，蒸馏水洗，苏木素复染，TBS洗；脱水，透明，封片. 显微镜观察，细胞核中有棕黄色颗粒者为凋亡细胞. 计算 移植肾中10个肾小球1000个细胞中发生凋亡的浸润淋巴细胞或肾小管上皮细胞为5～10时用“+”表示，10～20个时为“”，20个时为“ 统计学处理：应用SPLM软件进行数据分析, 统计方法为Willcoxon秩和检验和χ2检验，P为差异有显著意义. 2结果 急性排斥反应组与对照组凋亡细胞分布情况在急性排斥反应组中44例病例观察到淋巴细胞，34例患者观察到肾小管上皮细胞凋亡，20例未检测到细胞凋亡，而对照组淋巴细胞发生凋亡为4例(P=) ,肾小管上皮细胞凋亡为 16例(P＝). 说明在急性排斥反应类固醇冲击治疗后与非急性排斥反应患者移植肾中,淋巴细胞凋亡差异具有显著意义,而肾小管上皮细胞凋亡差异不显著(Tab 1) 表1浸润淋巴细胞和肾小管上皮细胞凋亡检测结果　(略) 分类与淋巴细胞凋亡分布的关系根据Banff分类，急性排斥组中，Ⅰ级排斥反应为16例，Ⅱ级为34例，Ⅲ级为14例，检测到淋巴细胞凋亡分别为：14例(%)，22例(%),8例(%). 急性排斥反应的严重程度与淋巴细胞凋亡无关(P=) 3讨论 器官移植后急性排斥反应中存