实验7 PH对酶反应速度的影响.docVIP

PAGE PAGE 2 实验7 PH对酶反应速度的影响 原理 在某一PH值附近，酶反应速度达到最大值，通常称这个PH为最适PH。关于酶反应速度受溶液PH值影响的机理一般认为有二种情况。其一是PH影响了酶分子的活性中心上某些必需基团的解离，从而影响了酶与底物的结合或者酶——底物络合物的多少，其二是当溶液的酸碱度过高时引起酶蛋白分子不可逆变性，使酶活性迅速下降，通称之为钝化。 牛胰蛋白水解酶作用与蛋白，其产物带有芳香环的肽或氨基酸与Folin——酚实际呈兰色反应，在波长680nm处有吸收峰，吸收峰的强弱表示产物量的多少，可根据产物量计算出酶的反应速度。 试剂 2%蛋白，2g蛋白用0.1N NaOH助溶，然后用6N HCL调节PH不大于9，并定容到100ml. 15%三氯醋酸 4.0mg/ml胰蛋白酶液。蒸馏水配制，冰箱保存。 0.1M醋酸——醋酸钠缓冲液（见副表）。 0.1M磷酸二氢钠——磷酸氢二钠缓冲液（见副表）。 0.1M硼砂——氢氧化钠缓冲液（见副表）。 Folin——酚试剂。 试剂甲：0.55M 试剂乙：在1.5L容积的磨口回流瓶中，加入100g钨酸钠，25g，700ml蒸馏水，50ml 85%磷酸及数滴溴，开口继续沸腾15分钟，以驱除过量的溴，冷却并稀释到1升，过滤，滤液呈绿色，置棕色瓶保存。使用时用标准NaOH滴定，以酚酞为指示剂，稀释使其为1N的酸。 操作 配