高效液相色谱简介及操作.pptx

会计学;一、高效液相色谱概述及原理;1.色谱的演化;;高效液相色谱：效仿气相色谱，用高压输液泵将流动相输入高柱效色谱柱，使其在柱内快速流动，并在柱末端附加检测器检测分离情况。高效液相色谱就这样诞生了。;高效液相色谱仪就这样诞生了;填料颗粒小（2~10μm），受到的阻力较大，为了能迅速地通过色谱柱，必须对载液施加15~30MPa的高压。;HPLC和经典液相色谱法的比较;3.高效液相色谱法的分类;4.如何阅读色谱图？？;;5.如何评价色谱峰？？;（a）柱效和分离度都不好；（b）分离度高，柱效低；（c）理想色谱峰;;分析未知物质------联用技术;二、高效液相色谱仪的结构;第17页/共36页;1 高压输液系统;（2） 高压输液泵 主要部件之一，泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性，常用的压力范围：(150～350)×105 Pa。　　　;高压泵的分类;2 进样系统;六通阀的结构：;色谱柱;4 检测系统;原理：朗伯-比尔定律;b. 示差折光检测器 (RID); c. 荧光检测器 (FLD); d. 蒸发光散射检测器(ELSD);5 数据处理系统;三、高效液相色谱基本操作步骤;（4）系统平衡 第一步：先用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶走管路中的杂质和水分。 第二步：平衡色谱柱 方法一：若流动相为有机相与水相的混合物，则第一步完成后，按照分析样品的需要调节有机相与水相的比例后冲洗流路约30分钟后，待基线走平后即可进样。 方法二：若流动相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸，则第一步完成后，先用95%的去离子水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节流动相的比例，冲洗流路约30分钟，待基线走平后即可进样。 ;（5）色谱柱平衡后，打开检测器（开灯） （6）测定样品 （7）清洗仪器 色谱柱及流路清洗 进样阀清洗 进样针清洗 ;四、主要注意事项;2 色谱柱使用的注意事项;Thank You!;感谢您的观看！