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第20章细胞基因分离鉴定和原位杂交 第一节细胞DNA RNA勺分离鉴定技术 一、培养细胞基因组 DNA的提取及鉴定 人和哺乳动物细胞基因组 DNA的分离通常是在有 EDTASarkosye等一类去污剂存在下， 用蛋白酶K消化细胞，随后用酚、氯仿抽提，经 RNase处理和纯化来提取 DNA可用于细胞 凋亡中对所引起DNA断裂、凝胶电泳呈现“梯形”条带的实验，在细胞凋亡章节中已介绍了 有关DNA的提取和凝胶电泳鉴定， 除此之外，提取纯化的DNA还可用于分析其结构， 序列限 制性内切酶片断长度多态性及其基因定位和克隆。 (一 )DNA提取方法： 取单层细胞，经无钙、镁 PBS洗一次，用0.25%胰蛋白酶消化，细胞悬液经 PBS洗2 次,弃上清，取细胞沉淀。 加入 2ml 细胞裂解液(10mMTris HCL pH8.0 , 0.1mol/L EDTA 10mmol/L NaCL, 1%SDS) 充分混匀，加入蛋白酶 K至终浓度为0.5?1g/L、Sarkosye终浓度为0.5%，混匀裂解蛋白 呈糊状。 50 C水浴2小时，转入37C水浴过夜，次日加入等体积的饱和酚，轻轻颠倒混匀， 以防止DNA断裂，约3分钟。 12000r/min 离心15分钟(室温) 取水相，再加入等体积酚 /氯仿(1:1),同样颠倒混匀，去除蛋白质 12000 r/min 离心15分钟(室温) 再重复步骤(4)，再用