八角莲悬浮培养情况.docxVIP

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2021-12-01 发布于天津
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八角莲悬浮培养情况.docx

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MS培，养基（ PH=5.8 ）大量元素（*10母液I） KN03 NH4NO3 KH2PO4 MgSO4.7H2O CaCI2.2H20 微量元素(*100母液n) KI H3BO3 Mn SO4.4H2O Zn SO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CaCI2 铁盐(*100母液川) 19g 16.5g 1.7g 3.7g 4.4g 83g 620mg 2.23g 860mg 25mg 2.5mg 2.5mg Na2EDTA（乙二胺四乙酸钠）3.73g FeSO4.7H2O 2.78g 有机成分（*100母液W）肌醇 10g 甘氨酸 200mg 盐酸硫胺素VB1 10mg 盐酸吡哆醇VB6 50mg 盐酸 VB5 或 VPP 50mg 各激素母液配方（0.1mg/ml） TDZ（脱叶灵）：用0.1mol/LNaOH溶解0.01g脱叶灵，定容至 NAA（萘乙酸）：用乙醇溶解 6-BA（ 6-苄氨基嘌呤）：用0.1mol/LHCI溶解0.1g6-BA粉末定容至浓盐酸 120mol/L-----0.1mol/L（1ml 浓盐酸稀释至 120ml） 1L母液中加7g琼脂，30g蔗糖 100ml 100ml 2014.7.6 (AA:400ml): MS + TDZ0.2mg/L + NAA0.1mg/L + 800ul 400ul 琼脂（10 瓶） (AB:400ml): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L + 1.6ml 800ul (AC:300ml): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L （10 瓶） 1.2ml 600ul 果胶酶酶解液的配置查资料：（1） CPW 溶液：KH2PO3 27.2mg/L KNO3 101mg/L CaCl2.2H2O 1.48g/L MgSO4.7H2O 246mg/L KI 0.16mg/L 琼脂（10 瓶） CuSO4.5H2O 0.025mg/L ⑵预处理液：600mmol/L甘露醇，用 CPW溶液配制 3）酶解液：0.5%果胶酶，3mmol/LMES,用洗涤液配制（4）洗涤液：含 500mmol/L甘露醇的 CPW溶液，原生质体悬浮液，含 620mmol/L蔗糖的CPW溶液按100ml来配： KH2PO3 2.72mg KNO3 10.1mg CaCI2.2H2O 0.148g MgSO4.7H2O 24.6mg KI 0.016mg CuSO4.5H2O 甘露醇：10.92g MES: 0.059g 果胶酶：0.5g 0.0025mg 实际实验数据： (1) CPW 溶液(按 500ml) KH2PO3 0.014g KNO3 0.051g CaCl2.2H2O 0.739g MgSO4.7H2O 0.126g KI 14.5mg稀释取液 CuSO4.5H2O 253mg稀释取液（在后面的酶解液配制中该两种药品质量怀疑添加错误） ⑵酶解液的配制（取 100mlCPW溶液加入）甘露醇：10.921g Tris: 5.241g MES: 0.0572g 果胶酶：0.522g 植物材料均取之于原留愈伤组织，在 AC的10瓶液体培养基中每瓶加入 1ml酶解液 2014.7.7 (AD:1L):MS + (AD:1L): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L + 琼脂（30瓶）母液I: 100ml 母液n :5ml 1L溶液母液川:200ul 蔗糖：30g, 母液W :5ml 琼脂粉：7g TDZ:4ml lNAA:2ml 2014.7.9 (AE:2L):MS + TDZ0.4mg/L (AE:2L): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L + 琼脂(60 瓶) 母液I: 100ml 1L溶液（2份）母液川:200ul 蔗糖：30g TDZ:4ml 母液n :5ml 母液W :5ml 琼脂粉：7g NAA:2ml 300ml溶液 (AF:): MS + TDZ0.4mg/L + NAA0.2mg/L 母液n :1.5ml 母液W :1.5ml 6-BA:1.6ml NAA:600ul 配大量元素母液I 母液I: 30ml 母液川:60ul 蔗糖：9g TDZ:1.2ml 1L : KNO3 NH4NO3 KH2PO4 MgSO4.7H2O CaCI2.2H20 2014.7.13 600ml溶液母液I: 60ml 母液川:120ul 蔗糖：18g 6-BA TDZ 19g 16.5g 1.7g 3.7g 4.4g 母液n :3ml 母液W :3ml NAA J V 按如下正交表添加激素: TDZ NAA 6-BA 0.1(5ul) ① 0.2(