基因克隆的质粒载体.pptVIP

第一个用于基因克隆的天然质粒pSC101，它含有一个EcoR?酶切位点，一个四环素抗性选择记号（Tetr ），插入外源片段后不影响其复制功能，但该质粒分子量较大，拷贝数低只具有抗菌素抗性基因，无法使用插入失活技术选择重组分子。 第六十二页，共120页 ColE1质粒在其唯一的单切割位点EcoRl中克隆外源DNA片段后，可根据对大肠杆菌素E1的免疫性选择转化子，不能合成大肠杆菌素E1的菌落是具有重组质粒的转化子。但对大肠杆菌素E1的免疫筛选，在化学上是相当麻烦的。 第六十三页，共120页 2.理想的质粒载体必须具备的基本条件 (1) 具有复制起点 自我增殖的基本条件，一般具一个复制子。 (2) 具有抗菌素抗性 理想的质粒载体具有两种抗菌素抗性基因。 (3) 具有若干限制酶切单一位点（MCS） (4) 具有较小的分子量和较高的拷贝数 低分子量的质粒易于操作，克隆外源片段后仍能有效的转化给受体细胞，同时低分子量的质粒对限制酶具有多重识别位点的几率也较低；较高的拷贝数，可获得大量的克隆基因。 第六十四页，共120页 以Ampr和Tetr为选择性标记，克隆位点在这两个选择性标记的单酶切位点上。选择AmprTets或AmpsTetr的重组子