基因克隆的载体系统.pptVIP

第六十二页，共117页 ?噬菌体载体一般用途 ：主要用于克隆 DNA 片段 构建 cDNA 文库和基因组文库，并从中筛选目标基因 亚克隆在大容量载体（如粘粒）中增殖的外源 DNA 片段 第六十三页，共117页 第六十四页，共117页 ?载体的体外包装 （1）体外包装 在试管中与?噬菌体的头部和尾部蛋白人工装配成噬菌体颗粒，才能高效地感染细菌，把重组DNA注入受体菌中 包装过程: E 基因编码头部蛋白的主要成分（占头部总蛋白的70%）。 D基因的产物也是头部蛋白，但主要与? DNA 进入头部和头部的成熟有关（只占20%）。 第六十五页，共117页 第六十六页，共117页 ?DNA载体的优点 ? -DNA可在体外包装成噬菌体颗粒，能高效转染大肠杆菌 ? -DNA载体的装载能力为23 kb，远远大于质粒的装载量 重组? -DNA分子的筛选较为方便 ? -DNA载体适合克隆和扩增外源DNA片段，不适合表达外源基因 用在真核生物基因组文库的建立 第六十七页，共117页 三、柯斯质粒载体 1、柯斯质粒载体的构建 2、柯斯质粒载体的特点 3、柯斯克隆 4、柯斯克隆的改良 第六十八页，共117页 考斯质粒与噬菌粒 ? -DNA载体和M13-DNA载体的装载量最大分别为23 kb和1.5 kb，但在很多情况下，往往需要克隆更大的外源DNA片段，考斯质粒和噬菌粒载体