基因克隆的载体.pptVIP

1.4.1.质粒载体的选择记号 新陈代谢特性； 对大肠杆菌素E1的免疫性； 抗菌素抗性； 四环素抗性、氨苄青霉素抗性、 链霉素抗性、卡那霉素抗性 大多数质粒本身带有抗菌素基因； 抗菌素抗性记号便于操作、易于选择。 第三十页，共85页 1.5 不同类型的质粒载体 高拷贝的质粒载体 克隆的目的是为分离大量的高纯度的克隆基因 低拷贝的质粒载体 有些克隆的编码基因，其产物含量过高会严重的干扰寄主细胞的正常新陈代谢活动。 编码表面结构蛋白质的一些基因、调节细胞基础代谢活动的蛋白质编码基因以及囊纤维化跨膜传导调节蛋白质编码基因等。 第三十一页，共85页 (1)失控的质粒载体 复制控制是温度敏感型的低拷贝的质粒。 Example： pBEU1和pBEU2质粒，在30度下，每个寄主细胞只含有适量的拷贝数，当培养温度超过35度时，质粒的复制将失去控制，每个细胞中的拷贝数便持续上升。在这种高温环境下，细胞的生长和蛋白质的合成可按正常的速率持续2～3小时。最后得到超量的基因编码产物，细胞生长受抑制失去存活能力，积累的质粒DNA占细胞总DNA的50%。 第三十二页，共85页 (2)插入失活型