基因克隆及蛋白表达.pptVIP

进行蓝白筛选，对阳性克隆进行扩增 在加入IPTG和X-gal的培养基上，长出蓝色克隆。如果在多克隆位点内插入外源DNA，由于它破坏了α-肽的表达，因而在加入IPTG和X-gal的培养基，不能长出蓝色克隆，这就是所谓的蓝白筛选。 第五十五页，共85页 质粒的提取及酶切鉴定 第五十六页，共85页 第五十七页，共85页 第四部分：外源基因的原核表达 第五十八页，共85页 外源基因的原核表达 外源基因的表达是研究和探索基因功能、基因表达调控机制以及编码蛋白质的结构和功能的重要方法，亦是制备和生产新型蛋白质药物、新型诊断试剂必不可少的手段。外源基因通过在宿主细胞中的表达可大量获得其产物。 第五十九页，共85页 一、原核表达系统常用的载体及其应用 （一）大肠杆菌表达系统 （二）大肠杆菌载体的表达方式 第六十页，共85页 引物设计的基本原则 3. 引物5’末端的碱基无严格限制 当引物的长度足够时, 引物5’末端的碱基可不与模板DNA互补而呈游离状态。可在5’端加上限制内切酶位点,启动子序列或其他序列等,以便于PCR产物的分析克隆。 第二十三页，共85页 引物设计的基本原则 4.在一个PCR反应中的一对引物之间不应存在互补序列,特别是3’末端应尽量避免互补,以免形成“引物二聚体”造成引物浪费和非特异性的扩增. 5.每个引物的内部应尽量避免形成二级结构,特别是引物的末端应无回文结构.