亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C多态与胃癌的遗传易感性临床医学.docVIP

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C多态与胃癌的遗传易感性临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C多态与胃癌的遗传易感性临床医学 1 1 材料和方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：云南人亚甲基四氢叶酸还原酶基因型多态性与乳腺癌易感性的关联临床医学 6 1资料与方法 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C多态与胃癌的遗传易感性临床医学 文1：亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C多态与胃癌的遗传易感性临床医学 DNA 甲基化是基因表达，DNA 的稳定性、完整性和诱变的重要决定因素，染色体和DNA甲基化异常都是可遗传的，是导致基因组不稳定性而引发肿瘤的重要机制[1]。相关研究表明，细胞内低甲基化是胃癌形成的一个重要原因，亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因多态会影响叶酸在体内的正常代谢，造成甲基不足，从而促进胃癌的产生，国内外刊物报道了此方面进行的一些研究。MTHFR基因在总的人群中呈高度多态性，在其编码区有2个常见的单核苷酸多态,即C677T 和A1298C，前者位于催化区而后者位于活性调节区 [2]。作者对江苏南京地区的170例胃癌病人和140例相匹配的正常对照者进行研究，分析MTHFR基因C677T 和A1298C多态性与胃癌发生的风险性的关系。 1 材料和方法 实验材料 标本来源 标本取自170例胃癌病人和140例正常对照者。病人分别来自东南大学附属中大 医院 、南京市鼓楼医院和江苏省人民医院，样品为肿瘤组织和外周血；年龄、性别相匹配的正常对照者来自东南大学校医院和东南大学附属中大医院，所取样品均为健康人的外周血。所有的病例和正常对照者均为江苏省南京市及其周边区域居住的汉族居民。病例组中男、女性分别为118例和52例，平均年龄为（±）岁；对照组男、女性分别为82例和58例，平均年龄为（±）岁。胃癌组和对照组性别、年龄分布差异无显著意义（P值分别为和），基因组DNA的提取采用标准的苯酚/氯仿法。 主要试剂 蛋白酶K、EDTA、TrisCl和饱和酚均为上海生工生物工程技术服务有限公司产品，限制性内切酶Hinf Ⅰ（10U#12539;μl-1）和Mbo Ⅱ（10U#12539;μl-1）为大连宝生物公司产品，所有的引物由上海博亚生物工程公司合成。 仪器 PTC225热循环仪（MJ Research, Watertown, MA），紫外分光光度计（岛津公司），凝胶成像系统（Syngene，Gene Genius） 实验方法 MTHFR基因型分析 MTHFR基因分型按我们已报道的方法 [3]进行。扩增含C677TDNA片段的PCR引物序列为：F，5′TGA AGG AGA AGG TGT CTG CGG GA3′和R，5′AGG ACG GTG CGG TGA GAG TG3′，扩增产物长度为198bp。 扩增含A1298CDNA片段的PCR引物序列为：F，5′CTT TGG GGA GCT GAA GGA CTA CTA C3′和R，5′CAC TTT GTG ACC ATT CCG GTT TG3′， 扩增产物长度为163bp。 30μl反应体系包括：200μg#12539;ml-1DNA模板1μl ，双侧引物各1μl，10×缓冲液3μl，25mmol#12539;L-1的Mg2+ 2μl，10mmol#12539;L-1的dNTP μl, 的TaqDNA聚合酶（5U#12539;μl-1）。反应条件：94℃预变性5min，94℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 30s，35个循环，72℃延伸7min；C677T基因型和A1298C基因型可以分别由限制性核酸内切酶HinfⅠ或MboⅡ鉴别，677Ｃ→Ｔ突变后可被HinfⅠ识别。纯合变异基因型的ＰＣＲ产物经酶切后产生175bp和23bp两个片段，杂合子产生198、175和23bp3个片段 ,而野生型基因型只有198bp 1个片段。含1298AA的PCR产物有4个MboⅡ酶切位点 ,产生56、31、30、28和18bp5个片段 ;Ａ→Ｃ突变后失去1个酶切位点，因此，纯合突变型产生84、31、30和18bp4个片段，杂合子则含84、56、31、30、28和18bp6个片段（图 1）。取适量PCR 产物分别与足量的限制性内切酶于37℃温育过夜，酶切产物于3%琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色。M1. 100bp梯度DNA分子质量标志；