荧光分光光度法.pptVIP

第六章 荧光分光光度法 ;基本要求： 了解荧光光谱法的基本原理和应用特点。了解荧光分光光度计的组成以及特点。掌握荧光光谱法的定量分析方法。了解影响荧光强度的因素。 ;第一节 概论 ;一、应用： ;第二节 基本原理 ; 最常见的光致发光：荧光和磷光。 两者发光机理不同，寿命不同。荧光寿命10-9～10-6秒，磷光寿命10-3～10秒。 荧光可由激发态的分子产生，也可由激发态的原子产生，本章介绍分子荧光。 由于荧光的产生由价电子引起，所以，荧光光??属于电子光谱，其波长范围位于：紫外光区和可见光区。 ;二、激发光谱和发射光谱 ;⒉ 发射光谱 固定激发光波长，以荧光波长对荧光强度F所作的光谱曲线。;三、分子荧光与分子结构的关系 ;四、荧光强度与浓度的关系 ;第三节 荧光分光光度计 ;二、主要部件及功能 ;3．样品池 须用石英材料制成。 4．荧光单色器 将样品池中的散射光、反射光、杂质荧光等滤掉，只让荧光通过。 出射狭缝宽度可调。 5．检测器 光电转换元件，测定荧光的强度。 检测方向与激发光方向垂直：在垂直方向上没有透过光的干扰。 由于荧光的强度较弱，一般以光电倍增管作检测器。;第四节 定量分析 ;⑴配制一系列待测成分的标准溶液 C1 C2 C3 C4 C5 ⑵测出相应的荧光强度 F1 F2 F3 F4 F5 ⑶建立工作直线（ F →C） ①作图法 ②回归法 ⑷测量待测样品，得F样 ①从工作直线上找到待测成分的浓度C样 ②由回归方程计算出C样;二、影响荧光强度测定的因素 ; 4．溶剂 有些溶剂会使荧光效率下降，也可能带来干扰荧光。 ;灵敏度高。可高达ppb级（10-9），甚至ppt级（10-12）。 选择性好，与能产生荧光的物质少有关。;思考题;二、问答题 试述分子荧光产生的过程。 试述分子荧光强度与浓度的关系式，并说明公式成立的前提条件及原因。 分别说明荧光分光光度计两个单色器的作用，以及将光路设计成直角方向的原因。 为什么可见光分光光度计的光路是直线方向，而荧光分光光度计的光路是直角方向？