课程汇总中国药科大学新药筛选中心细胞培养基础知识培训材料.pptVIP

* 细胞培养基础知识培训材料 中国药科大学新药筛选中心 此材料仅供中心内部使用 最终解释权归新药筛选中心 细胞培养基本介绍 血清 培养基 其他产品 体外培养细胞的分型 ? 贴壁细胞：细胞贴附在支持物表面生长，只有依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞 悬浮细胞：培养时不贴附于底物而成悬浮状态生长，主要来自血，脾或骨髓 细胞培养主要成分 ①血清 ②基本培养基 ③细胞培养试剂（抗生素、细胞解离，生长因子等） ④平衡盐溶液 血清产品及FAQ 血清的作用 血清提供： 营养和能量来源 生长和粘附因子 肽和类固醇激素 载体蛋白 保护细胞： 免受蛋白酶、毒性物质、pH值波动、机械剪切力、氧化及自由基的损伤。 血清 血清的来源 目前国内可以销售HyClone来自澳大利亚、新西兰、南美的胎牛血清，并且均提供血清来源说明及质量检测报告 血清类型 胎牛血清 特殊处理的胎牛血清 新生牛血清及小牛血清 其他血清：成牛血清、马血清、猪血清等 胎牛血清替代品 检测体系 每批产品都经过严格的细菌、支原体、病毒、内毒素、血红蛋白等检测 如何保存和解冻血清？ a. 血清应该在-20℃保存。如果一次无法用完一瓶，应该无菌分装后冷冻保存。注意：避免反复冻融。 b. 解冻时将血清首先置于冰箱2-8℃中12-24小时使之缓慢部分溶解，然后再放在室温下使之全溶。注意：溶解过程中要每隔一段时间（2小时）缓慢地摇动血清使之混匀。 血清出现沉淀？ 1.纤维蛋白：是常出现的较大的沉淀物。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（形成絮状纤维蛋白的可溶性前体）在处理过程中仍处于溶解状态，在经过最后的过滤后发生凝结，形成纤维蛋白沉淀。 2.磷酸钙：是一种常见的沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养时会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染 3.其他的脂类和蛋白 4.血清中的沉淀物是难以预测和预防的，但通常沉淀不会影响血清的质量 如何避免血清出现严重沉淀？ 血清有轻微絮状物，但产品比较澄清或略显浑浊是正常现象，但下属操作会致使血清出现严重沉淀，应尽量避免 a.储存不当：反复冻融；长期储存在2-8℃；在室温下放置时间过长 b.不正确地解冻操作，融化时没有混匀。 c.热灭活血清 d.37℃培养血清 e.γ射线辐照 血清常见问题 如想去除这些絮状沉淀物，可将血清分装到无菌离心管中，以400g离心，上清液即可直接加入到培养液内 不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜 血清选择？ a. 尽量使用同批次的血清；如果需要更换血清批次，则需事先验证3代以上，因此建议客户单次购买大量血清； b.原代细胞或ES细胞，提供澳洲或新西兰的FBS不同批次进行试用，选择使用效果好的批次； 培养基产品及FAQ 培养基 ? 培养基（Medium）是供微生物、植物和动物细胞生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物 (糖)、氨基酸、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。 ?细胞培养液= 基础培养基+10%FBS+营养添加剂+抗生素 细胞培养液= 减血清培养基+2%FBS+营养添加剂+抗生素 细胞培养液= 无血清培养基+营养添加剂+抗生素 培养基和相关产品 普通液体培养基（Liquid Media，LM） 普通干粉培养基（Dry Powder Media，DPM） 减血清培养基（Reduce Serum Media） 无血清培养基（Serum-Free Media，SFM） 营养成分添加剂（Nutrient Media Supplements） 试剂和辅助产品（Reagents and Cell Culture Support） 普通培养基的应用 BME ( Basal Medium Eagle): 是由Eagle发明的，是最简单的培养基，只有11种氨基酸和盐及一些维生素。最先用于培养小鼠的L 细胞和人类HeLa细胞，现在广泛用于各种细胞的培养 MEM or EMEM (Eagle’s Minimum Essential Medium): 是BME的升级版，氨基酸浓度是BME的两倍，适用于更多的细胞 DMEM or DME (Dulbecco’s Modification of Eagle’s Medium) 是Dulbecco改进的MEM. 氨基酸和维生素浓度是BME的4倍.最先葡萄糖的浓度是 1g/L，称为低糖DMEM, 后来增加到4.5g/L，称为高糖DMEM，广泛用于各种贴壁细胞培养。 IMDM（