检测老年胃癌患者腹腔灌洗液CK19CEAmRNA的意义临床医学.docVIP

检测老年胃癌患者腹腔灌洗液CK19CEAmRNA的意义临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：检测老年胃癌患者腹腔灌洗液CK19CEAmRNA的意义临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：HCG检测的意义临床医学 6 1 HCG检测在女性相关性疾病中的检测意义 7 2 HCG检测对胎儿监测的意义 8 3 HCG检测对男性患者激素水平的影响 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 检测老年胃癌患者腹腔灌洗液CK19CEAmRNA的意义临床医学 文1：检测老年胃癌患者腹腔灌洗液CK19CEAmRNA的意义临床医学 近年来老年胃癌病人逐渐增多，目前多采用以手术为主的根治术，但发现时多属中晚期故预后仍较差。影响预后的主要因素之一是腹腔转移，腹腔脱落癌细胞(ECC)是腹膜转移之源〔1〕。因此早期检出ECC，及时采取有效的干预措施，是改善胃癌病人预后的关键。由于脱落的游离癌细胞数量少，浓度低，使得传统的细胞学检查(CY)阳性率低，有很高的漏诊率〔2，3〕。细胞角蛋白19(CK19)在胃癌腹腔转移灶中的表达却存在争议。以往巢式RTPCR技术检测CK19、癌胚抗原(CEA) mRNA已成功地运用于胃癌淋巴结、骨髓及血液微转移的研究，国内外少见用于胃癌腹腔微转移的研究，尤其关于老年患者更无报道。本研究采用巢式RTPCR技术检测老年胃癌患者腹腔冲洗液中瘤细胞CK19、癌胚抗原(CEA)mRNA的表达，探讨其对早期诊断腹腔转移的临床实用价值。 1 材料与方法 检测对象 标本来源于本院2006年9月至2007年2月接受手术的45例老年胃癌病人，均经手术及病理证实。其中男性29例，女性16例，年龄60～76岁，中位年龄66岁。临床病理学特征：45例中大体浆膜受侵18例，病理累及浆膜31例，组织学类型高中分化28例、低分化17例，淋巴结有转移26例、无转移19例，病理分期Ⅰ+Ⅱ期21例、Ⅲ+Ⅳ期24例。 方法 标本制备 开腹探查腹腔后，于Douglas窝或左膈下置入一根16号导尿管，注入200 ml无菌生理盐水，在不触动原发灶的情况下，轻轻搅动后吸出，如有 自然 腹水则直接吸出。所有标本均分成两部分，一部分送本院病理室行细胞学检查。2 500 min离心10 min，弃上清液，沉渣涂片，HE染色后镜检。另一部分立即于4℃下2 500 min离心10 min，弃上清液，置-80℃冰箱备用。 mRNA提取 采用mRNA抽提试剂盒(公司)提取腹腔冲洗液离心沉渣mRNA，采用PrimeScriptTMRTase,2Step RTPCR试剂盒(宝生物工程有限公司)行逆转录。操作步骤按照试剂盒说明书进行。 巢式PCR扩增CK19、CEA产物 宝生物工程(大连)有限公司合成引物序列。CK19 mRNA巢式PCR引物〔4〕：A,5′AAGCTAACCATGCAGAACCTCAACGACCGC3′;B,5′TTATTGGCAGGTCAGGAGAAGAGCC3′;C,5′TCCCGCGACTACAGCCACTACTACACGACC3′;D,5′CGCGACTTGATGTCCATGAGCCGCTGGTAC3′。CEA mRNA巢式PCR引物〔5〕：E,5′TCTGGAACTTCTCCTGGTCTCTCAGCTGG3′;F,5′TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC3′;G,5′GGGCCACTGTCGGCATCATGATTGG3′。内对照βactin引物序列〔6〕：上游引物：5′CACTGTGTTGGCGTACAGGT3′;下游引物：5′TCATCACCATTGGCAATGAG3′。PCR按说明书反应分两步，第一步模板为反转录的产物cDNA，CK19 mRNA的引物为A、B,CEA mRNA的引物为E、F。反应条件：94℃变性30 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，30个循环。第二步取第一步扩增产物2 μl，CK19 mRNA的引物为C、D，CEA mRNA的引物为F、G，以同样步骤扩增30个循环。 阴、阳性对照设置 以胃癌细胞SGC7901相应mRNA为阳性对照，阴性对照组采用空白对照，即除不加模板外，其他各种成分与待测样品相同。各样本βactin作为内对照。 电泳 取10 μl PCR反应产物行2%琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳(100 V，20 min)以鉴定有无CK19、CEA特异性条带。 统计学方法 采用统计软件包，进行χ2检验。 2 结 果 腹腔冲洗液RTPCR检测结果 45例胃癌病人中25例