川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子β1的影响药学.docVIP

川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子β1的影响药学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子β1的影响药学 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：芪参益气滴丸对急性心肌梗塞大鼠转化生长因子β1的影响药学 7 1 器材与仪器 8 2 方法 8 3 结果 10 4 讨论 11 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 16 正文 川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子β1的影响药学 文1：川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子β1的影响药学 糖尿病肾病（DN）是终末期肾衰竭的主要原因之一。DN发生的机制目前仍不十分清楚,涉及到一系列分子事件和组织学改变,特别是多种细胞因子通过不同途径、不同机制发挥重要作用。这些细胞因子通过旁分泌和自分泌方式发挥其病理生理作用，导致系膜细胞生长增殖，细胞外基质增加、增厚和系膜区扩张，促进DN的发生。DN时TGF-b1mRNA及其蛋白水平的升高与肾功能不全、系膜细胞增生和间质纤维化密切相关，参与了DN发生 发展 的多个环节［1，2］。川芎嗪是从中药川芎根茎中提取分离的生物碱单体，临床研究证实川芎嗪对ＤＮ具有显著的治疗作用［3］，但是否为通过干预DN肾小管间质损害，减少TGF-β1表达，进而达到其治疗目的，尚无报道。本研究即采用单肾切除链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠糖尿病肾病模型，观察川芎嗪对其小管间质损害及转化生长因子-β1表达的干预，为其防治DN提供理论依据。 1 材料与方法 动物 60只雄性清洁级Wistar大鼠（成都中医药大学实验动物中心提供），重量200～220 g。所有大鼠置于空气流通，温度18～25℃，湿度40%～70%的环境中，给予12 h光照，自由进食、饮水。标准化饲养房笼子驯化喂养1周，实验前禁食1 d。 药品与试剂 盐酸川芎嗪片（50 mg/ 片）由北京市燕京制药厂生产(批准文号：国药准字H)；贝那普利由北京诺华制药有限公司生产（批准文号：国药准字H）；STZ购自Sigma公司；鼠抗人TGF-β1单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。 动物模型及分组 糖尿病肾病模型的建立 将60只大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后，常规消毒，从距右脊肋骨 cm处斜向外方切口，于腹膜外暴露肾脏并剥离肾脏周围的脂肪组织，行右侧肾脏切除术。整个手术过程遵循无菌操作原则。术后2周，将其随机分为两组：正常手术组（n=12）和糖尿病模型组（n=48）。糖尿病模型组于禁食12 h后一次性腹腔注射STZ（纯度%），临用前将STZ溶于 mol/L，pH 的无菌枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液中，终浓度为1%（冰浴中新鲜配制，随配随用），按60 mg/kg体重的剂量进行单次腹腔内注射，72 h后，尾静脉采血，测空腹血糖浓度＞ mmol/L，尿糖阳性（与正常组比较P＜），确定造模成功。 分组及治疗 将造模成功糖尿病模型组48只大鼠随机分为4组：模型组（n=12），贝那普利对照组（n=12），川芎嗪低剂量组（n=12），川芎嗪高剂量组（n=12）；另设正常手术组12只，共5组动物。除模型组外，其余各组按组别每只分别予以贝那普利 mg/（kg·d），川芎嗪50，150 mg/（kg·d），生理盐水灌胃2 ml，共12周。 观察指标及方法 空腹血糖(FPG)、肾功能［包括尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）］测定各组大鼠分别于治疗前和治疗后第6周与第12周，采用快速血糖仪与全自动生化分析仪检测。 UAER测定 于治疗第4，8，12周各检测1次。 肾脏病 理学 观察 于实验第12周将大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后，常规消毒，于腹膜外暴露肾脏并剥离肾脏周围的脂肪组织，摘取肾脏，常规固定，HE染色。 肾间质TGF-β1蛋白表达 采用免疫组化方法：肾组织常规脱蜡水化，3%H2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶；用微波暴露抗原，封闭内源性生物素；滴加1∶10正常兔血清，10%小牛血清蛋白室温下孵育2 h，封闭非特异性抗原。滴加兔抗大鼠TGF-β1单克隆抗体（1∶200），4℃过夜。滴加生物素化二抗IgG（1∶200），37℃ 40 min；洗涤后室温下滴加DAB显色液，镜下控制显色时间。苏木素复染、1%盐酸酒精分化。常规脱水、透明、封片。实验均采用删除第一抗体作内阴性对照。在光镜200×视野下，随机选择10个视野，用Mias-2000图形分析系统进行分析。 统计学处理 采用SPSS for Windows 统计软件进行统计分析，结果用±s表示，组间差异采用方差分析、t检验。 2