《分子生物学检验技术》学习指南.doc

模块1 绪论 掌握：临床分子诊断学基本概念、研究内容与分析对象。 熟悉：临床分子诊断技术在临床中的应用（感染性疾病分子诊断，遗传性疾病的分子诊断，肿瘤的分子诊断，个体化医疗等）。 了解：分子诊断学的发展简史及展望。 模块2 基因与人类基因组计划 掌握：基因的概念和功能类别，基因组、DNA多态性和SNP的概念 熟悉：人类基因组多样性 了解：基因概念的发展和人类基因组计划 模块3 基因组的结构与功能 掌握：真核生物基因组的结构与功能特点 熟悉：原核生物和病毒基因组的结构与功能特点 模块4 核酸分子杂交技术 掌握：分子杂交、分子杂交技术的概念及基本原理，核酸探针的设计。 熟悉：核酸探针的类型，寡核苷酸探针的特点及设计原则，核酸探针的标记方法（切口平移法（nick translation），随机引物法 (random priming)，末端标记法，化学标记法），理想的探针标记物应具备的特性，核酸分子杂交的影响因素，常见的核酸分子杂交技术（Southern印迹杂交，Northern印迹杂交，斑点杂交，荧光原位杂交）。 了解：核酸分子变性、复性等基本概念，核酸分子杂交的基本步骤，核酸探针的纯化（乙醇沉淀法，凝胶过滤层析法）与检测，其他的分子杂交技术（吸附杂交，亲和吸附杂交，磁珠吸附杂交，发光液相杂交，能量传递法，液相夹心杂交）。 模块5 分子克隆 掌握：分子克隆、载体的定义，各类工具酶的功能、分类及用途等，载体应具备的特征，分子克隆的基本步骤。 熟悉：Ⅱ型限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶及末端转移酶的作用特点，限制性内切酶的主要用途，常用克隆载体的结构、性质及筛选鉴定方法，质粒载体的特点，目的基因与载体的连接方法（如粘性末端DNA分子的连接，平末端连接法等），感受态细胞的制备，常用重组体的筛选方法（抗生素抗性筛选、B-半乳糖苷酶系统筛选）。 了解：动物细胞基因克隆的载体，表达载体种类、结构及功能，其他穿梭载体，目的基因制备的主要方法，原核生物基因和真核生物基因表达的特点，提高克隆基因表达效率的途径，分子克隆或基因工程的发展现状。 模块6 生物芯片技术 掌握：基因芯片的原理及在医学中的应用。 熟悉：生物芯片，基因芯片，芯片微阵列制备，基因芯片探针合成，样品与基因芯片的杂交结果的检测及分析。 了解：基因芯片的分类，基因芯片技术的基本技术环节，蛋白质芯片的分类，组织芯片分类，组织芯片的制备，组织芯片的应用，缩微芯片实验室。 模块7 DNA序列测定 掌握：Sanger双脱氧链末端终止法、化学降解法的测序原理及要点。 熟悉：DNA测序技术基本原理，测序体系，链末端终止法的特点，电泳图谱的识读，化学降解法的特点。 了解：DNA测序策略，其它测序技术（焦磷酸测序技术，杂交测序法，单分子测序技术，24小时基因组测序设想，自动化测序）。 模块8 核酸扩增技术 掌握：聚合酶链反应技术原理，荧光定量PCR技术基本原理，聚合酶链反应技术常见问题及体系优化，引物设计的一般原则。 熟悉：Ct 值，荧光域值，PCR 三个基本步骤（变性－退火－延伸），标准的 PCR 反应体系的五要素，PCR 扩增产物的检测与分析方法，常见的PCR技术（如巢式PCR，逆转录PCR，多重PCR，定量PCR），荧光定量PCR技术（荧光染料法，荧光探针法，Taqman技术等），临床基因扩增检验实验室管理与质量控制，临床基因扩增检验实验室的规范化设置，临床基因扩增检验实验室质量保证，室内质量控制（IQC），室间质量评价（EQA）。 了解：聚合酶链反应技术简史，降落PCR，热启动PCR，PCR促进剂，荧光定量PCR测定的数据处理，实时荧光定量 PCR技术的应用，核酸序列依赖性扩增，连接酶链反应，链替代扩增反应，分枝DNA信号放大系统。 模块9 蛋白质组学研究技术 掌握：蛋白质组学（proteomics）概念，双向凝胶电泳技术的概念和特点，酵母双杂交技术和噬菌体展示技术的基本原理。 熟悉：蛋白质组学研究的策略和内容，双向凝胶电泳技术，凝胶上蛋白质的检测，蛋白质染色方法，电泳图的分析处理，蛋白质相互作用的研究技术，蛋白质组翻译后修饰分析（如硫酸化、糖基化等）。 了解：蛋白质组学诞生的科学背景与技术基础，各种色谱技术（如液相色谱技术，离子交换色谱，反向色谱等），质谱的基本原理，生物质谱仪的结构和性能，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，ESI-MS，串联质谱，多肽序列标签鉴定法，酵母双杂交技术和噬菌体展示技术的应用。 模块10 感染性疾病的分子诊断 掌握：感染性疾病分子诊断的特点、策略和临床意义，细菌耐药性产生的原因及耐药性基因的检测。 熟悉：流行性感冒病毒、乙肝病毒、人类免疫缺陷病毒的分子诊断方法，结核分枝杆菌、幽门螺旋杆菌、肠出血性大肠埃希菌的分子诊断方法。 了解：分子