第七章微生物上的生长与的环境条件.pptVIP

三、细菌纯培养的生长 ;①延滞期lag phase （滞留适应期） 菌种初接入新鲜培养液内，微生物细胞需要通过自身生理机能的调节逐步适应新环境。表现为细胞数量不增加了但细胞个体体积增大，代谢活跃。 ②对数期logarithmic growth phase 细菌在这个时期生长旺盛，代谢活力强。分裂速度快，菌数以指数级数增加，代时稳定。细胞在形态、生理等方面较为一致，是研究微生物生理代谢和遗传变异的好材料。在工业生产中，也用对数期细胞作为扩大培养的种子液。;在对数生长期内，细菌数目的增加是按指数级数增加的，即 20 →2 1 →22 →23 ……2n 这里的指数 n 为细菌分裂的次数或者增殖的代数，也就是一个细菌繁殖n代产生2n 个细菌。 如果在对数期开始时间 t1的菌数为 x1 ，繁殖 n 代后到对数期后期t2的菌数为 x2，则代时（Generation time，G）（即每增加一代所需要的时间）应为： G=（t2 - t1）/n ;先求代数n 由于x2 = x1· 2n lgx2 = lgx1 + nlg2 ； n=（lgx2 - lgx1）/lg2 n = 3.3 · lg (x2 /x1 ) 即G =（t2 - t1 ）/3.3 · lg (x2 /x1) ;例如：在一细菌培养液中第一次测得的细菌数为 104 /ml，经过培养 4 h后，又测得菌液中的细菌数为 108 /ml，求此菌的世代时间和在此时间内繁殖的代数。 根据公式：G = （t2 - t1 ）/3.3 · lg (x2 /x1) t2 - t1 = （4 - 0）× 60 min = 240 min x2 = 108 x1 = 104 lg(x2 /x1 ) = lg108 ~ lg104 = 8 - 4 = 4 代入上式 G = 240/3.3 × 4 = 240/13.2 = 18 min 即在上述培养液中，世代时间为 18 min。 细菌繁殖代数 n = (t2 - t1)/G = 240/18 = 13.3 繁代。;③稳定期(stationary phase) 又称恒定期或最高生长期。处于稳定期的微生物，新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等，整个培养物中二者处于动态平衡，此时生长速度，又逐渐趋向零。 在一定容积的培养基中，细菌为什么不能按对数期的高速率无限生长呢? 这是由于对数期细菌活跃生长引起周围环境条件条件发生了一系列变化，某些营养物质消耗，有害代谢产物的积累，以及诸如pH、氧化还原电位、温度等的改变，限制了菌体细胞继续以高速度进行生长和分裂。;稳定期的细胞内开始积累贮藏物，如肝糖、异染颗粒、脂肪粒等，大多数芽孢细菌也在此阶段形成芽孢。如果为了获得大量菌体，就应在此阶段收获，因这时细胞总数量最高； 这一时期也是发酵过程积累代谢产物的重要阶段，某些放线菌抗生素的大量形成也在此时期。 从上可以看出，稳定期的微生物，在数量上的达到了最高水平，产物的积累也达到了高峰，此时，菌体的总产量与所消耗的营养物质之间存在着一定关系，这种关系，生产上称为产量常数。;④衰亡期(decline phase) 细菌死亡率逐渐增加，群体中活菌数目急剧下降，出现了“负生长”。其中有一段时间，活菌数换几何级数下降，故有人称之为“对数死亡阶段”。 这一阶段的细胞，有的开始自溶，产生或释放出一些产物，如氨基酸、转化酶、外肽酶或抗生素等。菌体细胞也呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊，有的细胞内多液泡，革兰氏染色反应的阳性菌变成阴性反应等。;并不是所有细胞均处于完全相同的生理状态，因此，在细菌生长的整个周期，细菌数和培养时间，往往是一条缓慢上升以后又逐渐下降的曲线。 认识和掌握细菌生长曲线，对指导发酵生产具有很大作用： 计算生长速率和代时； 不同生长期的细胞在结构和生理上可能有很大差别，了解了这些，就能根据需要进取样和收获； 不同的生长期理化因子对微生物的影响了可能不同。一般来说，对数生长期的细胞较为一致，因此常用于研究细胞的新陈代谢。;四、连续生长;恒浊连续培养 不断调节流速而使细菌培养物浊度保持恒定的连续培养叫恒浊连续培养。 由光电装置检测培养容器中的浊度，根据浊度变化控制新鲜培养液流入和旧培养流出速度，使容器内菌液浓度恒定。 工业发酵中用此法可获得大量菌体及代谢产物。;恒化培养 控制恒定流速，使由于细菌生长而耗去的营养物及时得到补充，又叫恒组成连续培养。这样，细菌的生长速率将取决于限制性因子的浓度。 恒化连续培养多用于微生物学的研究工作中。从遗传学角度来讲，它允许我们作长时间的细菌培养而能从中分离不出的变种；从生理学方面看