临床试验工作小结.pptVIP

临床试验工作小结;《基础分子生物学》中 多个概念;2/ 核酸（nucleic acid）: 是生物体细胞内一类关键 生物大分子。其关键生物学功效是作为遗传信息 载体。;DNA 结构: ;3/ 染色体 组装（真核生物）;4/ 染色体组;产品临床试验工作可分为五方面: 一、工作前 计划与准备: 试验方案确定与试验用具 准备; 二、试验样本准备: 人全血基因组DNA提取及信息整理; 三、试验样本检测: RT-PCR检测及结果分析; 四、工作步骤中问题 发觉、交流与处理; 五、收尾与总结。;一、工作前 计划与准备 种类与数量;二、试验样本准备: 人全血基因组DNA提取 节奏与程度;提取步骤: 1、第二次加入细胞裂解液CL（裂解红细胞）时, 需要猛烈振荡, 以充足混匀沉淀（可见管中液体深红, 并有较多泡沫, 管底无结块沉淀）; 2、加入缓冲液GB后, 充足颠倒混匀（如不充足, 可能会产生白色沉淀, 通常37℃放置时会消失, 不影响后续试验）; 3、56℃水浴时间延长至30 ~ 40 min, 其间颠倒混匀数次, 观察溶液是否变得清亮, 并为搜集管编号（如未变清亮, 说明细胞裂解不根本, 可能造成提取DNA量少、纯度不加, 直接影响荧光检测）; 4、水浴后加入200 ul 无水乙醇, 出现絮状沉淀, 轻柔颠倒混匀（此时DNA析出, 故自此步骤开始, 颠倒要轻柔缓慢, 不然破坏DNA结构）; 5、最终向吸附膜中间位置悬空滴加100ul 超纯水。;三、试验样本检测: RT-PCR检测及结果分析 精细、次序、安全;RT-PCR 反应体系 分装与加样: 1、移液器 “连续吸放液”— 调移液器量程至23ul , 将排放按钮按至第一停点（第一档）, 再将吸头垂直浸入液面, 平稳松开按钮, 在液面之下, 再次将排放按钮按至第一档, 排出吸头尖端 气泡后, 松开按钮, 吸入液体, 以后放液只需按至第一档即是23ul（如吸头尖端仍有气泡, 可反复吸放, 直至排净气泡）; 2、样本放置次序、吸头安装次序、试验者感知次序三者形成“校正机制”, 保障次序加样（校正机制 建立, 有利于连贯而正确地加样）; 3、移液器 吸放液要“慢吸快放”, 且试验者要观察吸头尖端, 进行视觉“校正”, 避免吸空放空; 4、放???时, 吸头先伸入液面以下放出液体, 再在管壁处打净残液（如吸头仍存残液, 将移液器按至第二档, 将残液打至吸头尖端处, 拔掉吸头, 并再次安装回去, 将残液打回管中）; ;5、不能直接用手触摸PCR管, 因为人 手上含有荧光素, 沾染在管壁上 荧光素会影响荧光仪检测。操作时必需戴不含荧光物质 一次性手套而且要常常更换（应使用镊子夹取管子和管盖）; 6、吸头不要长时间暴露于空气中, 避免气溶胶 污染; 7、加样完成后, 盖紧盖子, 并离心; 8、超净工作台使用后, 用次氯酸钠擦拭, 避免试验环境污染; ;结果分析: ;分析中碰到 问题: