第5次培养宽物的观察与检测方法060209.pptVIP

;培养物的观察检测方法;活体染料可分为碱性活体染料和酸性活体染料两大类：;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;1．5.1 台盼蓝排除检测法： （1）2％台盼蓝溶液的配制：称取2g台盼蓝(trypan blue），加少量双蒸水研磨粉碎后，再加水至50ml，离心后取上清液，再加入1.8％NaCI溶液至100ml，即成工作液。 （2）活体染色与细胞计数 　1)　将1滴细胞悬液（贴壁细胞可经0.25%胰蛋白酶溶液消化后，吹打制成细胞悬液）与2滴台盼蓝液混合后，滴入细胞计数板。 　2)　2 min后，在显微镜下计数至少200个细胞。未着色的为活细胞，呈蓝色的为死细胞。计算活细胞的百分比。 　　　　　　　　　　;1．5.2 溴比乙锭和碘化丙锭排除检测法： 溴比乙锭（ethidium bromide, EB)和碘化丙锭（propidium iodine, PI）均为荧光染料，可与DNA特异性结合。 （1）染液配制：取EB或PI 5mg , 枸橼酸钠0.1g , NP-40 0.3 ml, 共溶于100 ml蒸馏水中。避光保存。 （2）荧光染色与计数：取细胞悬液和EB或PI染液各0.5 ml，混匀。 静置10～30 min后在荧光显微镜下计数。发橙红色荧光者为死细 胞。也可用流式细胞仪测定，激发光波长为488 nm。 2 h内荧光 保持稳定。　　　　　　　　　;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;4.3 免疫细胞化学方法及标记物的选择;4.3 免疫细胞化学方法及标记物的选择;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;目前，cRNA探针应用最为广泛。 一般认为，RNA-RNA杂交体的稳定性强于RNA-DNA杂交体，后者又强于DNA-DNA杂交体。 但是，RNA易于被环境中普遍存在的RNA酶所降解而造成假阴性结果，因此操作要求十分严格。 单链DNA探针由于PCR技术的推广，其合成与操作均比RNA探针简易，应用日渐增多。;培养物的观察检测方???;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;常用的对照试验如下： ① 预先用RNA酶或DNA酶消化靶核酸，然后进入正常杂交程序。结果应为阴性； ② 使用cRNA探针时，应用与靶mRNA碱基序列相同的同义RNA探针作对照。结果应为阴性； ③ 对于检测mRNA的原位杂交实验，可同时做该mRNA翻译产物（蛋白质或肽）的免疫细胞化学检测。结果应为阳性； ④ 用Southern或Northern印迹杂交法证明标本中含有原位杂交所要检测的DNA或RNA。结果应为阳性； ⑤ 使用半抗原标记的探针时，应设不加探针进行杂交的对照，以证实半抗原的非内源性。结果应为阴性。;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;培养物的观察检测方法;我的细胞培养计划 （手写和打印均可）;我的细胞培养计划 （手写和打印均可）;OVER; 谢谢！