16s rDNA鉴定微生物原理.ppt

* * 微生物鉴定原理 汇报人：王伟 STEP 01 STEP 02 STEP 03 STEP 04 微生物鉴定 原理 微生物定义、 分类 16s rDNA鉴 定细菌原理 ITS鉴定真菌 原理 目录 CONTENTS 01 微生物鉴定原理 微生物鉴定原理 通过DNA测序对微生物进行物种鉴定（菌种鉴定）是比传统生化鉴定更先进的鉴定方法。DNA测序不依赖菌种本身特点，对所有菌种均可使用。比传统生化鉴定更加快速，准确。 02 微生物定义、分类 定义 微生物是个体难以用肉眼观察的一切微小生物的统称。 分类 微生物定义、分类 微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。 微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。还有微生物是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。 03 16s rDNA鉴定细菌原理 1、我们的市场行为主要的导向因素，第一个是市场需求的导向，第二个是技术进步的导向，第三大导向是竞争对手的行为导向。 2、市场销售中最重要的字就是“问”。 3、现今，每个人都在谈论着创意，坦白讲，我害怕我们会假创意之名犯下一切过失。 4、在购买时，你可以用任何语言；但在销售时，你必须使用购买者的语言。 5、市场营销观念：目标市场，顾客需求，协调市场营销，通过满足消费者需求来创造利润。**** 6、我就像一个厨师，喜欢品尝食物。如果不好吃，我就不要它。***** 7、我总是站在顾客的角度看待即将推出的产品或服务，因为我就是顾客。*** 8、利人为利已的根基，市场营销上老是为自己着想，而不顾及到他人，他人也不会顾及你。**** 100% 33％ 100% 66％ 100% 100％ 16s rDNA简介 鉴定原理 鉴定步骤 16s rDNA鉴定细菌原理 01 02 定义： 16srDNA（16SrRNA为核糖体的RNA的一个亚基16SrDNA就是编码该亚基的基因。）鉴定是指用利用细菌16srDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。 16srDNA是细菌染色体上编码16srRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。 16S rRNA与16S rDNA的区别 16S中的S是一个沉降系数，亦即反映生物大分子在离心场中向下沉降速度的一个指标，值越高，说明分子越大。 rDNA 和rRNA中的小写字母r是ribosome(核糖体)的缩写。 rDNA指的是基因组中编码核糖体RNA（rRNA）分子的对应的DNA序列，也就是编码16S rRNA的基因。 rRNA指的是rDNA的转录产物，它是构成核糖体的重要成分，核糖体由许多小的rRNA分子组装而成，16S rRNA是其中一个组件. 一般所分析的对象都是16s rDNA，因为DNA提取容易，也比较稳定。。 16s rDNA简介 原因 什么原因使得各学者和分类学家使用16s rDNA鉴定细菌？ 16s rDNA保守性定义是什么？有什么作用？ 高变区 什么叫高变区？怎么样通过高变区鉴定种属关系，种间关系？ 鉴定原理 鉴定原理 保守性 鉴定原理 原因 16srDNA由于其种类少，含量大(约占细菌RNA含量的80%)，分子大小适中，存在于所有的生物中，在结构与功能上具有高度的保守性。同时还含有中度保守和高度变化的序列区域，具有高变性。 可变区序列因细菌不同而异，恒定区序列基本保守，所以可利用恒定区序列设计引物，将16S rDNA片段扩增出来，利用可变区序列的差异来对不同菌属、菌种的细菌进行分类鉴定。 鉴定原理 保守性 定义：基因的保守型指的是某一段序列在进化演变的过程中，在不同的物种都都一直保留。 作用：科学家认为这些跨物种的相似性证明了某个特殊的基因完成了一些许多生命形式所必须的基本功能，因此在进化过程中保留了这些序列。 保守序列区域反映了生物物种间的亲缘关系，16S rDNA分子的序列特征为不同分类级别的近缘种系统分类奠定了分子生物学基础。 鉴定原理 高变区 细菌16S核糖体RNA（rRNA）基因含有9个“高变区”（V1-V9），其在不同细菌中表现出相当大的序列多样性。没有一个区域可以区分所有细菌;因此，需要进行系统研究，比较每个区域对特定诊断目标的相对优势。 各区域序列差异性 鉴定原理 V1 V2 V3 V6 V4、5、7、8 （核苷酸69-99）V1区域可用于区分常见的致病性链球菌sp。并区分金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌（CONS）物种。这个短序列是设计金黄色葡萄球菌特异性探针的理想选择。 （核苷酸137-242）V2区域可以将细菌物