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四、基因工程的基本操作 2、运载体的构建 3、目的基因导入受体细胞 1、目的基因的获取 4、目的基因的检测与鉴定 第二十八页，共54页 PCR技术 在生物体外复制DNA片段的核酸合成技术 原理： 目的： 前提： 过程： 扩增目的基因 DNA双链复制 有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 DNA模板 DNA解链 引物结合到互补DNA（DNA聚合酶） 第二十九页，共54页 第三十页，共54页 目的基因与运载体结合 带目的基因的DNA 质粒与目的基因黏性末端相同 带目的基因的重组质粒 DNA连接酶 质粒 相同限制酶切割 DNA重组 第三十一页，共54页 2、运载体的构建 第三十二页，共54页 3、目的基因导入受体细胞 （1）将目的基因导入植物细胞 （2）将目的基因导入动物细胞 （3）将目的基因导入微生物细胞 常用农杆菌转化法 常用显微注射法 常用大肠杆菌转化 体细胞 受精卵 用Ca2＋处理细胞 第三十三页，共54页 （1）将目的基因导入植物细胞 第三十四页，共54页 4、目的基因的检测与鉴定 DNA mRNA 蛋白质 特性（抗虫或抗病） 活性比较 分子水平 个体水平 DNA分子杂交技术 分子杂交技术 抗原－抗体杂交 抗 虫或抗病的接种实验 与天然产品比较 第三十五页，共54页 DNA分子杂交技术 第三十六页，共54页 DNA分子杂交技