Sourthernblot和Northernblot原理分析和总结.pdfVIP

Sourthern blot 和 Northern blot 原理 （一）Southern Blot 原理： 将待检测的 DNA分子用 / 不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分 离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上， 固 定 后再与同位素或其它标记物标记的 DNA或 RNA探针进行反应。如果待检物中 含有与探针互补的序列， 则二者通过碱基互补的原理进行结合， 游离探针洗涤后 用自 显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大 小。 用途：检测样品中的 DNA及其含量， 了解基因的状态 , 如是否有点突变、 扩增重 排等。 DNA= 琼脂糖电泳 = 印迹转移 = 预杂交 = 杂交（变性探针） = 洗膜 = 放射自显影或显色 （二）Northern Blot 原理：在变性条件下将待检的 RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同 Southern Blot 相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（ mRNA）及其含量。 mRNA提取 = 甲醛变性电泳 = 印迹转移 = 预杂交 = 杂交（变性探针） = 洗膜 = 放射自显影或化学发光 （三）二者异同 Southern blot 是分析 DNA的杂交技术，Northern blot 是分析 RNA的，而 Western blot 是分析蛋白质的 Southern 和 Northerin 原理基本相同，都是利用 DNA或 RNA的复性过程，但过 程上也有区别，主要是 Southern 是先电泳后变性，而 Northern 是先变性后电泳； Southern 是碱变性，而 Northern 采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性，因为 采用碱变性会导致 RNA水解 （四）探针标记技术 1 标记物：放射性和非放射性两种 放射性： 非放射性：生物素、地高辛素、荧光素 2、标记方法 （1）切口平移法 （2）随机引物法 （3）末端标记法 （4）单链 DNA探针标记 （5）寡核苷酸探针标记法