微生物的诱变育种.pptxVIP

会计学;;第一节 诱变育种的试验设计和准备工作;微生物;高产突变型菌株是一种数量性状的遗传变异，是由多基因决定的： 1. 这些基因不可能通过一次诱变全部引起突变 2. 高产菌株产量的提高，是多代诱发突变积累的结果。只有那些每次诱变后有1～2个控制产量的基因突变，使产物合成稍有增加，又能维持其最起码代谢平衡的菌株才能生存下来。 3. 高产菌株的环境适应能力差，育种时必须注意调整环境条件。; 1. 在诱变育种前，应该对大生产的设备和工艺具有相当的知识和全面的了解。 2. 诱变育种工作量大，周期长，对一般周期为7～10天的抗生素菌种来说，一代诱变需2～3月，因此事先需作好充分准备，如全面了解菌种培养特征和生化特征，以及有关培养条件对其影响等，最后再进行严密设计，确定正确的选育程序和方法。;诱变育种工作的三个主要环节： 1. 诱发突变 出发菌株、诱变剂及其剂量的选择、影响诱变效果的因素等 2. 突变株的筛选 筛选条件(培养基和培养条件)、便捷的筛选方法等 3. 最佳环境条件的调整 突变株最佳培养条件的确定;1. 区分不同菌落类型 ;2. 出现不同菌落类型的原因 主要原因：遗传因素 由遗传因素造成的不同类型菌落是一种变异现象，属不同遗传特性的个体，而且可以遗传给下一代。 其它原因：非遗传因素，如培养基组成或培养条件的改变等 非遗传因素产生的“变异”是一种假变异，不能遗传；菌种重新移回原来的培养基和培养条件，形态可恢复原状。;1. 多方面考查菌种的生活史，了解它们的形态、生理、生化等生物学特性，以及这些特性与代谢产物合成的关系。 土霉素产生菌斜面孢子培养3~4天好于9~10天 2. 研究菌种的某些生物学特性与产量合成的相关性。 头孢霉素产量与孢子大小和数量成正比.; 1. 培养基 2. 培养基斜面制备技术 3. 移种的密度 4. 温度 5. 湿度 6. 药品和原材料质量;了解菌种有效产物中的各种组分在代谢合成过程中与培养条件的关系 建立一个准确、简便、快速检测产物的方法 研究最佳的菌种保藏培养基和培养条件;第二节 诱变育种的步骤与方法;;野生菌株:产量低，但对诱变因素敏感，变异幅度大，正突???率高； 最好是由生产育种中的自发变异株 采用具有有利性状的菌株 考虑选择己发生过其他变异的菌株 选择增变菌株的变异株以堤高致变敏度 选取能累积少量所需产物或前体物菌株;1. 选择具备一定生产能力或某种特性的菌株作为出发菌株 2. 选择纯种作出发菌株 3. 选择出发菌株应考虑其稳定性 4. 连续诱变育种过程中如何选择出发菌株;;5. 选择出发菌株的其它因素 6. 采用多出发菌株(3-4个) 7. 菌种代谢特点;一般丝状菌的野生菌株多数为异核体，如果菌种背景复杂，用诱变剂处理后的变株中，负变率将增加。因此，微生物菌种选育之前的出发菌株和新变种获得之后，都要进行自然分离，即菌种纯化。 常用的纯化方法有划线分离法和稀释分离法；若仍达不到要求，则需采用显微镜操纵器分离单孢子，培养形成单菌落，得到纯菌株。 ;1. 供试菌株的孢子或菌体要年轻、健壮 细胞生理活性方面既要同步，又要处于最旺盛的对数期。 对于细菌来说，常常通过前培养达到要求。 对于丝状菌来说，制备菌悬液时力求90％以上为单孢子，并务必除去菌丝片段，因为一般菌丝是多核的。 菌悬液的孢子或细菌数可用平板计数、血球计数器计数和光密度法测定。 制备菌悬液通常采用生理盐水，如果用化学诱变剂处理时，则应采用相应的缓冲液配制。;2. 菌悬液制备方法 (1) 细菌 采用同步化的预培养方法：;(2) 产孢子菌类 处理材料是孢子，而不是菌丝。 (3) 不产孢子的真菌 直接采用年幼的菌丝体进行诱变处理。 三种方法： 菌丝尖端法 处理单菌落周围尖端菌丝 混合处理法;1. 诱变剂种类的选择 (1) 选择诱变剂 (2) 根据菌种特性和遗传稳定性来选择诱变剂 遗传稳定的:先强后弱; 遗传不稳定的:先选优良出发菌株,后温和诱变 (3) 参考出发菌株原有的诱变系谱来选择诱变剂;2. 最适诱变剂量的选择 ;(3) 诱变剂对产量的诱变作用，大致趋向是：处理剂量大，杀菌率高(90～99％)，在单位存活细胞中负变菌株多，正变菌株少；但在不多的正变株中可能筛选到产量提高幅度大的变株。;3. 诱变剂种类和剂量选择的一般原则 (1) 经长期诱变后的高产菌株，采用低剂量处理； (2) 遗传性状不太稳定的菌株，宜采用较温和的诱变剂和较低的剂量处理； (3) 要求筛选具有特殊性状的菌株，或较大幅度提高产量的菌株，可用强诱变剂和高剂量处理； (4) 诱变史短的野生低产菌株，开始时采用较高剂量，然后逐步使用较温和的诱变剂或低剂量处理； (5) 多核细胞菌株，采用较高剂量更合适。;1. 单因子处理;(1) 两个以上因子同时处