凝胶色谱法分析和总结.pdfVIP

凝胶色谱法 添加摘要 凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发 展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由 于设备简单、操作方便，不需要 有机溶剂 ，对高 分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称 分 子排阻色谱法 。 凝胶色谱法主要用于 高聚物 的相对分子质量分级 分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被 生 物化学 、分子生物学 、生物工程学 、分子免疫学 凝胶色谱系统 以及 医学 等有关领域广泛采用，不但应用于科学 实验研究，而且已经大规模地用于 工业 生产。 凝胶色谱法 - 分类 根据分离的对象是 水溶性 的化合物 还是有机溶剂可溶物，又可分为 凝胶过滤色谱 （GFC）和 凝胶渗透色谱 （GPC）。 凝胶过滤色谱一般用于分离水溶 性的大分子，如多糖类化合物。 凝胶的代表是 葡萄糖 系列，洗脱 溶剂主要是水。 凝胶渗透色谱法主要用于有机溶 剂中可溶的高聚物 ( 聚苯乙烯 、 聚氯已烯 、聚乙烯 、聚甲基丙烯 酸甲酯 等 ) 相对分子质量分布分 析及分离，常用的凝胶为交联聚 苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为 四氢呋 凝胶色谱仪 喃等有机溶剂。 凝胶色谱不但可以用于分离测定 高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布， 同时根据所用凝胶填料不同， 可分离油溶性和 水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到 100 以下。 近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。 化学结构不同但相对分子质量相近的物质， 不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。 凝胶渗透色谱技术原理 凝胶色谱法 - 分子筛效益 一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶 色谱柱 时，各分子在柱内同时进行着两种不同 的运动： 垂直向下的移动和无定向的扩散运动。 大分子物质由于直径较大， 不易进入凝胶颗 粒的 微孔 ，而只能分布颗粒之间， 所以在洗脱时向下移动的速度较快。 小分子物质除了可在 凝胶颗粒间隙中扩散外， 还可以进入凝胶颗粒的微孔中， 即进入凝胶相内， 在向下移动的过 程中， 从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒， 如此不断地进入和扩散， 小分 子物质的下移速度落后于大分子物质， 从而使样品中分子大的先流出色谱柱， 中等分子的后 流出，分子最小的最后流出，这 种现象叫 分子筛效应 。具有多孔 的凝胶就是 分子筛 。 各种分子筛的孔隙大小分布有一 定范围，有最大极限和最小极限。 分子直径比凝胶最大孔隙直径大 的，就会全部被排阻在凝胶颗粒 之外，这种情况叫 全排阻 。两种 全排阻的分子即使大小不同，也 不能有分离效果。直径比凝胶最 小孔直径小的分子能进入凝胶的 全部孔隙。如果两种分子都能全 部进入凝胶孔隙，即使它们的大 小有差别，也不会有好的分离效 凝胶色谱法原理 果。因此，一定的分子筛有它一 定的使用范围。 在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大， 完全不能进入凝胶的任何内孔隙； 三是分子大小适中， 能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应 的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变 凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子， 在凝胶床中