自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对软骨损伤修复的研究_曾统.pdfVIP

680 新医学 2021 年 9 月第 52 卷第 9 期 研究论著 · · 自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对 软骨损伤修复的研究 曾统  唐硕  张迪  邹峰  邹学农  陈海堡  靳松 【摘要】 目的 探讨自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对新西兰兔软骨缺损的修复作用。方 法 构建自组装纳米多肽水凝胶，利用扫描电镜技术检测丝素蛋白支架的结构，培养兔源性骨髓 间充质干细胞（BMSC ），流式细胞仪检测第2 代BMSC 表面蛋白CD34 、CD45 、CD90 和CD105 - 表达，活细胞/ 死细胞双重染色检测水凝胶与BMSC 的生物相容性，CCK 8 法检测BMSC 增殖情 况检测，实时定量PCR 检测水凝胶对BMSC 的蛋白聚糖（AGN ）、Ⅱ型胶原a1 （COL2a1 ）、成软 - 骨分化调控基因Sox 9 mRNA 的表达，分析水凝胶对BMSC 成软骨分化的影响，并利用甲苯胺蓝 染色评估水凝胶对兔软骨缺损的修复效果。结果 原子力显微镜观察功能化自组装多肽可以形成 纳米纤维网状结构；第2 代BMSC 表面蛋白结果显示 CD105 阳性和CD45 阴性的比例为91.22% ， 而CD90 阳性和CD34 阴性的比例为 95.10% 。生物相容性检测示兔BMSC 在自组装水凝胶中生 - 长状态稳定，以绿染的活细胞为主。CCK 8 法检测示BMSC 复合水凝胶组在培养3 d 时增殖能力 高于BMSC 组（ 0.001 ）。PCR 检测示空白组、水凝胶、诱导液组和水凝胶与诱导液混合组的 P - AGN 、COL2a1 、Sox 9 mRNA 表达在第2~4 周比较差异均有统计学意义（ 均 0.001 ），有水凝 P 胶的环境更有利于BMSC 成软骨分化。甲苯胺蓝染色结果显示水凝胶负载干细胞对软骨缺损的修 复作用优于BMSC 组和缺损对照组（ 均 0.05 ）。结论 自组装纳米多肽水凝胶负载BMSC 对软 P 骨缺损的修复具有明显的促进作用。 【关键词】 丝蛋白降解；骨髓间充质干细胞；软骨分化；水凝胶；自组装 Repair of cartilage defects with stem cells loaded with silk fibroin degradation products self-assembled nano-peptide hydrogel Zeng Tong， Tang Shuo， Zhang Di， Zou Feng， Zou Xuenong， Chen Haibao， Jin - Song. Department of Spinal Surgery， the Eighth Affiliated Hospital of Sun Yat sen University， Shenzhen 5180