细胞分化的分子机制——转录后的调控.pptxVIP

细胞分化的分子机制——转录后的调控会计学第2页/共22页早期发育对RNA信息的选择——不同类型细胞 对nRNA的选择不同第3页/共22页核酸保护实验(放射性intron或exon探针与总RNA杂交后再RNase消化)表明：海胆钙结合蛋白基因CyIIIa在原肠胚的外胚层中表达EctEn/mesRNA加工前三个胚层中的RNA量无差异。加工后的RNA主要存在于外胚层中。nRNA核酸run-on(在膜上固定intron序列与放射性RNA探针杂交)实验表明：Spec1基因在原肠胚的内、中、外胚层细胞核中都表达，但成熟的Spec1 mRNA只存在于外胚层中。第4页/共22页二、RNA加工水平的调控（一）、同一基因的初始转录物（nRNA） 经选择性拼接可产生不同的成熟RNA原肌球蛋白基因α-原肌球蛋白基因生殖细胞的DNAIgMIgDδ区B淋巴细胞的DNA，发生重排μ区nRNAmRNA第5页/共22页重链可变区（抗原结合区）在淋巴细胞形成过程中，发生基因重 排（DNA水平）重链恒定区发生分子转换，该模式通过RNA加工完成前体RNA第6页/共22页相同基因在不同发育时期或不同组 织细胞中拼接不同，合成不同的蛋白质降钙素/神经多肽CGRP mRNA前体第7页/共22页选择性RNA加工与性别决定果蝇性别表型的决定事件，通过3个主要性别决定基因RNA的不同拼接模式，引起差异基因表达（二）、RNA 3’末端的决定第8页/共22页绝大多数真核生物nRNA在剪接之前，先进行3’末端断裂和多聚腺苷酸化加工，这种加工由顺式和反式作用元件调控。1、顺式作用元件AAUAAA序列：位于3’末端，对其下游10-30bp位点发生的裂解是必需的；GU或U富积序列：位于3’末端AAUAAA区域下游，调控mRNA 3’末端裂解的效率。2、反式作用元件 （人癌细胞）特异性核蛋白因子：可识别发生裂解和进行多聚腺苷酸化的顺式因子；poly（A）聚合酶：用于合成多聚腺苷酸尾；裂解因子I和II：mRNA前体的裂解酶；裂解刺激因子：可显著提高裂解反应的效率第9页/共22页（三）、mRNA向核外的运输推测：RNA在核基质内完成转录和加工，然后将mRNA运输到核膜孔，由此运出核外，但机制尚不十分清楚。然而，已知细胞分化中基因选择性表达调控的另一种方式是细胞核以何种方式处理mRNA前体，通过调控，有的mRNA运出核外，有的不能运出；已发现：一种特殊的病毒蛋白对于mRNA运输是必需的。第10页/共22页第二节 翻译和翻译后的调控一、翻译水平的调控 1. 翻译过程（mRNA → 特异多肽链的合成）3个阶段氨基酰-tRNA与核糖体结合；aa离开tRNA，aa之间肽键、缩合；核糖体沿mRNA移动；AUGUAG UAA UGA第11页/共22页第12页/共22页2. mRNA寿命的不同对蛋白质合成的调控 ——通过mRNA的选择性降解和mRNA稳定性不同调控蛋白质的合成不同基因的mRNA的半衰期不同，主要受其3`UTR控制。短寿命mRNA的3’UTR通常含有一个或多个AU富集区，其作用是促进Poly(A)降解。rabbit3’β-珠蛋白RNA的3’UTR中含有3个C富集区，稳定，半衰期17h一种生长因子mRNA的半寿期不超过30minC-fos mRNA5’UTR coding sequence 3’UTR成纤维细胞AU富集区肿瘤细胞第13页/共22页mRNA降解性能的差异可以影响细胞的功能c-fos基因编码正常成纤维细胞分裂必需的一种蛋白质第14页/共22页3. 激素对特定mRNA稳定性的影响如Prolactin（泌乳刺激素）仅提高牛的casein（酪蛋白）基因转录水平2倍，提高其mRNA寿命25倍，使mRNA更多次的翻译。第15页/共22页二、早期发育中母体效应因子的影响1、卵母细胞中合成并贮藏大量的发育信息（mRNA和蛋白质），这些信息在排卵以前至早期发育过程中逐渐被利用；2、每个卵母细胞中贮藏20 000 – 50 000种不同的mRNA，每种mRNA大约1 600个拷贝；3、贮藏的信息在卵细胞中梯度分布或者均匀分布第16页/共22页三、翻译和翻译后调控的机制1、卵母细胞中翻译调控机制的假说mRNA masking（掩蔽）: mRNA与其它蛋白结合成ribonucleoprotein (RNP) complex,阻止与核糖体结合；卵成熟或受精后，离子强度改变或蛋白磷酸化等导致RNP不稳定/解体，翻译得以进行。5’ Cap（7-甲基鸟苷酸）的调控：如某些种类(蛾)，其卵中的部分mRNA的5`-鸟苷酸在受精后才甲基化，然后开始翻译。mRNA sequester（隐蔽）: 指mRNA被阻隔于蛋白合成装置。如海胆未受精卵