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会计学;抗体——生物体最奇妙的分子;免疫球蛋白的分子结构及分类 免疫球蛋白的功能 免疫球蛋白基因结构及多样性产生的机制 免疫球蛋白的来源 抗体分子的应用;免疫球蛋白的分子结构及分类;一、免疫球蛋白的基本结构;1、重链和轻链 重链可分为μ、γ、α、δ、ε链；轻链可分为κ、λ型。 2、可变区 （1）重链和轻链N端约110个氨基酸为可变区（variable region,V区)，V区存在3个高变区（hypervariable region,HVR1~3)及4个骨架区（framework region, FR1~4).三个高变区共同组成Ig 的抗原识别部位，形成与抗原决定???互补的表位。高变区也称互补决定区（complementarity-determining region, CD1~3)。 ;第6页/共55页;3、恒定区 重链和轻链C端为恒定区，不同Ig重链其不同长度，有的只有CH1~3,有的则由CH1~4，CH2（IgG)或CH3（IgM)有补体结合位点。 相同种属、同一类别的Ig 氨基酸序列基本恒定。 4、铰链区 铰链区位于CH1和CH2之间，含有丰富的脯氨酸。 IgG1,IgG2,IgG4和IgA的铰链区较短，而IgG3和IgD的 铰链区较长；IgM和IgE无铰链区。 有木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的酶切位点。;;免疫球蛋白的功能;;二、C区功能;2、结合细胞表面的Fc受体 （1）调理作用 是指抗体及补体促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用。IgG型抗体可通过Fc段与中性粒细胞及巨噬细胞上的Fc受体结合，增强其吞噬作用。 （2）抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC).是指表达Fc受体的细胞，通过识别抗体的Fc直接杀伤被抗体包被的靶细胞。如NK细胞，巨噬细胞等。 （3）介导?型超敏反应;3、通过胎盘 IgG是唯一通过胎盘的抗体，是一种重要的自然被动免疫机制。;15;16;17;18;19;20;21;2　ELISA的类型;2.2.1　双抗体夹心法测抗原;2.2.2 双抗原夹心法测抗体;2.2.3 间接法测抗体 ;2.2.4 竞争法测抗体 ;2.2.5 竞争法测抗原;2.2.6 捕获包被法测抗体;2.2.7 ABS-ELISA法 ;3. ELISA的试剂(A、B、C三部分);ELISA的试剂准备A ;　包被的方式;不易吸附的非蛋白质抗原可用间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法。 亲和素生物素 即用亲和素先包被载体，加入生物素化的抗原，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。 脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。 优点：试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100。;包被用抗原： 天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。 合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。 ;包被用抗体;包被的条件;　封闭;　洗涤液 　　在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸盐缓冲液。;　ELISA的试剂准备B ;　结合物用的抗原和抗体;;3.2.3 　结合物的制备; 结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中最后的酶活性测定。但游离的抗体则会与酶标抗体竞争相应的固相抗原，因此制备的酶结合物应予纯化，去除游离的酶和抗体后用于检测，效果更好。 制得结合物，最适的工作浓度就是指结合物稀释至这一浓度时，能维护一个低的本底，并获得测定的最佳灵敏度，达到最合适的测定条件和测定费用的节省。;结合物的保存;结合物的稀释液;试剂准备 C 酶的底物 ;酶的底物;TMB经HRP作用后共产物显蓝色。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液。酶反应终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为450nm。 ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。 HRP对氢受体的专一性很高，仅作用于H2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化物(urea peroxide)。 ;AP的底物为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯作为底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用N