生物化学：第十一章 核酸的生物合成.ppt

第四节 RNA的生物合成 一．原核生物的转录及转录后加工 (一) 转录（DNA指导下的RNA合成） 即以DNA为模板，在酶的作用下合成RNA的过程。 （二） 原核生物的转录特点 1 ． 底物——NTP(N=A,G,C,U)； 2 ． RNA聚合酶(RNA polymerase)，纯酶活性基团的有效部分结合有Zn2+； 3 ． 模板——DNA； 4 ． 合成方向 在单核苷酸的3`-OH上逐个加上与模板碱基配对的核苷酸，与模板的方向相反，朝5`—3`方向延长RNA链。 5 ． 不需要引物。 6 ． 转录时的聚合反应 n1ATP+ n2GTP+n3CTP+n4UTP +DNA（模板） —— （n1AMP-n2GMP-n3CMP-n4UMP） +(n1+n2+n3+n4)PPi + DNA（模板） 7 ． 只以双链DNA中的一条单链作为模板进行转录 其中，能够作为转录模板的DNA单链叫做模板链(template strand )或反意义链(antisense strand)、（-）链(minus strand)。 而另一条DNA单链则叫做非模板链(nontemplate strand)或有意义链(sense strand)、（+）链(plus strand)、编码链(coding strand)。 转录时并非全部DNA都要转录是有选择性的、不对称的。同一染色体上各基因的模板链并不是都在同一条单链DNA上。 8 ． RNA聚合酶无校正功能。 9 ． 合成的第一个核苷酸常常是GTP(pppG)或ATP(pppA)，其5`-三磷酸基在转录过程中保持完整，不产生PPi。 大肠杆菌中以GTP为多。 （三） RNA聚合酶的组成与功能 1 ．完整的RNA聚合酶的亚基组成 α2ββ`σ——全酶； σ——起始因子； α2ββ`——核心酶； 不同的细菌中，α、β、β` 亚基分子量较恒定，而σ因子分子量变化较大。 从亚基组成形式来看，大肠杆菌中只有一种RNA聚合酶。 2 ．各亚基的功能 （1） α亚基：有二聚体，参与RNA聚合酶的装配。 （2）β亚基：具有促进RNA合成过程中磷酸二酯键的生成的作用，尤其是与促进第一个磷酸二酯键的形成有关。 （3）β`亚基：主要负责酶和模板的结合。 各亚基的功能（参考） （1） α亚基：与模板的结合、酶的滑动及碱基识别有关。 （2）β亚基：与σ因子同核心酶的结合有关，并参与RNA合成的引发、延伸，与促进第一个磷酸二酯键的形成有关。 （3）β`亚基：参与酶和底物的结合，参与σ因子与核心酶的结合，此外还结合两个酶必需的Zn原子。 （4）σ因子：本身无催化活性，也不能单独与DNA结合，但可识别DNA上的RNA合成的起始信号，在RNA合成中起起动作用。 原核生物的RAN聚合酶 亚 基 分子量 功能 α 36 512 决定那些基因被转录 β 150 618 与转录全过程有关（催化） β ′ ′ 155 613 结合DNA模板（开链） σ 70 263 辨认起始点 （5）核心酶的功能 单独的核心酶也能催化RNA的合成，但片段长短不一，因为转录的起点不固定，它与DNA的结合无序列特异性。 加入σ因子，则可使之在特定部位结合。 因为σ因子可以改变酶与DNA之间的亲和力（即静电结合力，酶为碱性蛋白，DNA为酸性分子），使酶与DNA上的特定部位即启动子结合的亲和力增强，使核心酶能够特异结合在DNA上的特定部位即启动子上。 全酶与不同的启动子序列间的结合能力不一样，这导致不同的基因有不同的转录效率。 不同的σ因子导致RNA聚合酶（应为核心酶？）识别不同的启动子，从而表达不同的基因。 参考 另外，细菌的RNA聚合酶 可有单体==聚合体互变，这与离子强度有较大关系。 在低离子强度下具有可逆的凝聚作用。 （四） 转录的过程 1． 启动子与转录因子 （1） 启动子