生物化学课件：第一章 绪论.pptVIP

影响Tm值的因素 (3)溶液的性质 (2)DNA的性质和组成 大肠杆菌DNA在不同浓度KCl溶液下的熔融温度曲线 (1) DNA的均一性 RNA的变性 变性曲线不那么陡， Tm值较低。 复性 变性DNA在适当条件下，两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 核酸的杂交(hybridization) 三、DNA的三级结构 DNA的三级结构指DNA分子通过扭曲和折叠所形成的特定构象。 超螺旋（superhelix）是DNA三级结构中最常见的形式。 正超螺旋：3.4nm间距内碱基对数多于10个。 负超螺旋：3.4nm间距内碱基对数少于10个。 √ 第三节 RNA的分子结构 动物、植物和微生物细胞内都含有三种主要RNA： 核糖体RNA(ribosomel RNA, rRNA)； 转运RNA(transfer RNA, tRNA)； 信使RNA(messenger RNA, mRNA)。 RNA的种类及结构 一、tRNA 约占总RNA的10-15％。 tRNA分子的大小很相似，分子量25000左右,链长一般在73-93个核苷酸之间。 tRNA结构特点 碱基组成中含有较多的稀有碱基。 3 ′-末端都具有-CCA-OH的结构。 5 ′端多为G,也有C。 tRNA的二级结构都成三叶草型。三叶草结构由氨基酸臂、二氢尿嘧啶环、反密码环、额外环和TψC环五个部分组成。 假尿嘧啶核苷 双氢尿嘧啶 在三叶草型二级结构的基础上，突环上未配对的碱基由于整个分子的扭曲而配成对，目前已知的tRNA的三级结构均为倒L形。 二、mRNA 约占总RNA的5％。 不同细胞的mRNA的链长和分子量差异很大。 它的功能是将DNA的遗传信息传递到蛋白质，指导蛋白质的合成。 mRNA的结构特点 真核生物mRNA的结构特点 5′末端形成帽子结构：m7Gppp； 3′末端多聚A尾。 真核 单顺反子 5-末端有“帽子” 3‘-末端有polyA片段（～200）和非编码区 原核 多顺反子 5‘-末端无“帽子” 3‘-末端无polyA片段 顺反子： mRNA上具有翻译功能的核苷酸顺序。 抗核酸酶的水解 与蛋白质合成起始有关 作为mRNA与核糖体40S亚基结合的信号。 “帽子”结构的功能 三、rRNA rRNA含量很大，约占细胞RNA总量的80％左右。 是核糖核蛋白体的主要组成部分。 rRNA 的功能与蛋白质生物合成相关，可分别与 mRNA、tRNA作用，催化肽键的形成。 原核生物中的rRNA有三种：5S，16S，23S。 真核生物中的rRNA有四种：5S，5.8S，18S，28S。 四、RNA的高级结构特点 RNA是单链分子，分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。 形成“发夹型”结构或茎环结构。 tRNA中除了常见的碱基外，还存在一些稀有碱基。 第五节 核酸的性质及其分离纯化 一、核酸的一般物理性质 DNA：白色纤维状固体；RNA：白色粉末状固体。均微溶于水，不溶于有机溶剂。 核酸含有磷酸基团，因此具有酸性；水溶液中带负电荷，电泳时向正极迁移。 DNA溶液粘度很大，RNA溶液粘度小的多。 核酸受到强大离心力的作用时，可从溶液中沉降下来，其沉降速度与核酸的大小和密度有关。 （了解） 核酸的紫外吸收 核酸的最大吸收值在260nm附近。 紫外吸收是实验室中最常用的定量测定DNA或RNA的方法。 核酸纯度判定：OD260/OD280 纯DNA：1.8；纯RNA：2.0 OD260=1.0相当于50μg/ml双链DNA或40μg/ml单链 DNA(或RNA) or 20μg/ml 寡核苷酸。 A=ε·C·L朗伯-比尔定律 (Lambert-Beer Law) ε：摩尔消光系数，C：样品浓度；L：光程；A：吸收值 ε：DNA（~6000），RNA（7700-7800） （了解） 核酸的变性、复性和杂交 变性（denaturation) 在理化因素作用下，DNA双螺旋区的氢键断裂，两条互补链分开成为单链，从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变，这种现象称为DNA的变性。 变性是核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链，不涉及共价键的断裂。 多核苷酸骨架上共价键(3’,5’-磷酸二酯键）的断裂称为核酸的降解。 DNA的变性 方法：过量酸，碱