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⑷卤化盐类:KBr和NaCl可用于脂蛋白分离,KI和NaI可用于RNA分离其高于铯盐。NaCl梯度也可用于分离脂蛋白,NaI梯度可分离天然或变性的DNA。 ⑸Percoll:是商品名,它是一种SiO2胶体外面包了一层聚乙烯吡咯酮(PVP),渗透压低,它对生物材料的影响小,而且颗粒稳定,在冷却和冻融情况下还是稳定的,其粘度高,且在酸性pH和高离子强度下不稳定。它可用于细胞、细胞器和病毒的分离。 现在五十九页,总共八十三页。 LW型卧式螺旋卸料沉降离心机 现在二十七页,总共八十三页。 §4-2 离心过滤 一、离心过滤的原理 离心过滤是将料液送入有孔的转鼓并利用离心力场进行过滤的过程,以离心力为推动力完成过滤。兼有离心和过滤的双重作用。 滤饼 离心过滤机工作原理图 滤网 现在二十八页,总共八十三页。 以间歇离心过滤为例,料液首先进入装有过滤介质(滤网或有孔套筒)的转鼓中,然后被加速到转鼓旋转速度,形成附着在鼓壁上的液环。与沉降式离心机一样,粒子受离心力而沉积,过滤介质则阻止粒子的通过,形成滤饼。当悬浮液的固体粒子沉积时,滤饼表面生成了澄清液,该澄清液透过滤饼层和过滤介质向外排出。 现在二十九页,总共八十三页。 分批立式轴 分批卧式轴 二、离心过滤设备 间歇式 现在三十页,总共八十三页。 连续推送式 连续锥形滤网 连续式 现在三十一页,总共八十三页。 GT6H13 卧式离心过滤机 本机适宜过滤果汁或皮汁, 达到液—固体分离,提高汁的纯度。 自动连续卸料离心过滤机为 (锥形转鼓) 现在三十二页,总共八十三页。 基本参数 选择 颗粒d,固液?差,? 基本型号 固体物浓度 亚型 产物热稳定性 低温离心 流量Q, 规模 规格、台数 气溶胶,活cell 密封灭菌设计 §4.3 离心机的选用(P66) 现在三十三页,总共八十三页。 离心机的选择 现在三十四页,总共八十三页。 包含体产物分离工艺(牛生长激素分离提取) §4.4 离心机在生物工业中的应用(P67) 现在三十五页,总共八十三页。 §4.5 超离心法 超离心法: 根据物质的沉降系数、质量和形状不同,应用强大的离心力,将混合物中各组分分离、浓缩、提纯的方法。 现在三十六页,总共八十三页。 一、 超离心技术的原理 在某种介质中,使一种球形粒子从液体的弯月面沉降到离心管某部(如底部)所需的时间: 当粒子直径和密度不同, 移动同样距离所需的时间不同, 在同样的沉降时间, 其沉降位置也不同. 式中t为沉降时间,μ为悬浮介质的粘度,d为粒子直径,ρs为粒子密度,ρ为介质密度;r1为旋转轴中心到液体弯月面的距离,r2为从旋转轴中心到离心管底部的距离。 现在三十七页,总共八十三页。 利用它可以从组织匀浆中分离细胞器,其主要细胞成分的沉降顺序,一般先是整细胞和细胞碎片,然后是核、叶绿体、线粒体、溶酶体、微粒体和核蛋白体。 现在三十八页,总共八十三页。 二、超离心技术的分类 差速离心 (一)制备性超离心 (二)分析性超离心 等密度离心 一般密度梯度离心法 密度梯度离心 现在三十九页,总共八十三页。 采用不同的离心速度和离心时间,使沉降速度不同的颗粒在不同的离心速度及不同离心时间下分批分离的方法。 主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。 (一)制备性超离心 1、差速离心 (Differential centrifugation) 现在四十页,总共八十三页。 优点: 操作简单,离心后用倾倒法即可将上清夜与沉淀分开,并可使用容量较大的角式转子。 缺点: ①分离效果差; ②壁效应严重; ③颗粒被挤压。 现在四十一页,总共八十三页。 现在四十二页,总共八十三页。 2、密度梯度区带离心法 密度区带离心法是样品在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡,在一定离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。 密度梯度系统: 梯度介质有足够大的溶解度,不与分离组分反应,不会引起分离组分的凝集、变性或失活。 样品铺在密度梯度溶液表面,离心后形成若干条界面清楚的不连续区带。 现在四十三页,总共八十三页。 优点: ①分离效果好,可一次获得较纯颗粒; ②适应范围广,既能分
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