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4.5.1 种质资源离体保存的意义 离体保存具有省时、省地、省力，不受环境因素的影响，便于植物资源的交换等优点。 离体保存的目的是保持培养物不死亡、不变异、不被污染，在需要时可重新恢复。 4.5.2 种质资源离体保存的方法 4.5.2.1 植物种质资源的常温限制生长保存 （1）常温限制生长保存的概念 通过提高渗透压、添加生长延缓剂或抑制剂 、干燥、降低气压、改变光照条件等，限制培养物的生长，使转移继代的间隔时间延长达到保存种质的方法。 （2）常温保存的方法和原理 高渗保存法。 生长抑制剂保存法。 抑制生长的其他保存法。 4.5.2.2 植物种质资源的低温保存 （1）低温保存的概念 低温使植物生长速度就会受到抑制而减慢，老化程度延缓，因而延长了继代的时间间隔而达到保存种质的目的。 （2）低温保存的方法和原理 控制保存材料所处的温度和光照。0～6℃适宜保存温带起源植物的试管苗，15～20℃可用于热带植物试管苗的保存。 （3）超低温保存的基本程序 包括培养物的选取、材料预培养、冷冻、贮存、解冻、再培养等。 4.5.2.3 植物种质资源的超低温保存 （1）种质资源超低温保存的概念 超低温保存也叫冷冻保存，是将植物的离体材料经过一定的方法处理后，在超低温(-196℃液态氮)条件下进行保存的方法。 （2）种质资源超低温保存的原理 保存在液氮中的植物细胞代谢活动、生长基本停止，因而排除了遗传性状的变异，同时保存细胞的活力和形态发生潜能。 4.6 人工种子 4.6.1 人工种子的意义 人工种子是细胞工程中最年轻的一项新兴技术。最初是由英国科学家于1978年提出的。他认为利用体细胞胚发生的特征，把它包埋在胶囊中，可以形成具有种子的性能并直接在田间播种。 4.6.2 人工种子主要优点 培养条件可以人为控制，免遭大自然灾害性气候的不利因素,繁殖量大、快速繁殖性状优良、遗传性稳定的植物品种。 大量繁殖无病毒材料，以提高植物抗性、产量和商品品质 对生育周期长的多年生植物、育性不良的难于有性繁殖的植物可用人工种子技术进行繁殖。 人工种子体积小，贮藏运输方便。 人工种子如天然种子一样，具有坚硬的种皮，适于机械化播种。 4.6.3 人工种子的结构 4.6.3.1 体细胞胚 4.6.3.2 人工胚乳? 4.6.3.3 人工种皮 人工种子结构示意图 4.6.4 人工种子包埋方法 4.6.4.1 干燥包理法 23℃，相对湿度为70％土5％，黑暗条件下逐渐干燥。 4.6.4.2 液胶包理法 将胚状体悬浮在一种黏滞的流体胶中，直接插入土壤。 4.6.4.3 水凝胶法 用海藻酸钠等水溶性凝胶经与钙离子进行离子交换后凝固。 4.6.5 人工种子基本制作流程 人工种子基本制作流程 4.6.6 人工种子的分类 裸露的或休眠的繁殖体：如可以适当干燥的体细胞胚（如鸭毛草的体细胞胚）、休眠的微鳞茎和微块茎等 。 人工种皮包被的繁殖体：一些体细胞胚、原球茎等。 水凝胶包埋再包被人工种皮的繁殖体：大多数体细胞胚、不定芽、茎尖。 第4章 植物组织培养拓展技术 4.1 细胞培养 细胞培养是将从植物的培养物游离的细胞或细胞团，在人工培养基上进行的培养的方法。通过细胞继代培养，使细胞不断增殖，还能使高等植物的单个细胞经过离体培养后细胞分裂形成细胞团，再经过细胞分化最后产生完整的植株。 4.1.1 单细胞的分离 4.1.1.1 机械分离 先将植物叶片取下经过无菌处理后，在研钵中轻轻研碎，经过一定孔径的纱布或不绣钢滤网过滤，取出过滤后的研磨介质经过低速离心等其他处理使细胞得到纯化。 4.1.1.2 酶解分离 用纤维素酶和果胶酶等酶液处理适合植物外植体即可得到所需要的单细胞。 4.1.1.3 由组织培养物分离 离体培养的愈伤组织分离单细胞。 机械分离法和酶解分离法的比较 机械法 酶解法 细胞受到酶的伤害； 要质壁分离； 细胞产量高； 细胞不易破。 细胞不受到酶的伤害； 机械法不用质壁分离； 细胞产量低； 细胞易破。 4.1.2 单细胞的培养 4.1.2.1 看护培养法 含义：用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 用途：诱导形成单细胞系。 要求：看护愈伤组织处于活跃生长状态；愈伤组织和所要培养的细胞可以是同一个物种也可以不同。 看护培养的方法 （1）在一个培养瓶中加入一定量厚的固体培养基，灭菌后备用。 （2）无菌条件下，将一小块活跃生长的愈伤组织接种到培养基上，再在愈伤组织块上放一片已灭菌的滤