第十七章病毒检验技术2讲课文档.pptVIP

微生物学检验 现在一页，总共二十七页。 优选第十七章病毒检验技术 现在二页，总共二十七页。 第十七章病毒检验技术 返回总目录 现在三页，总共二十七页。 本 章 内 容 第一节 标本的采集、处理与运送 1 第二节 病毒的分离与鉴定 2 第三节 病毒学检测及诊断 3 现在四页，总共二十七页。 学习目标及重点 学习目标： 掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技术 熟悉病毒血清学诊断常用的方法 了解病毒感染的实验室快速诊断 学会病毒的培养基本操作 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则。 ★病毒学诊断及鉴定常用方法。 ★病毒培养的基本操作。 现在五页，总共二十七页。 第一节 标本的采集、处理与运送 一、标本的采集与处理 1. 采集时间：发病早期或急性期尽快采集。 2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液 3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。 采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌 现在六页，总共二十七页。 二、标本的运送与保存 1.标本的运送 尽快送检 冷冻、冷藏运输 防漏、专人、标记 2.标本的保存 -70℃可较长时间保存 可加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防病毒失活 第一节 标本的采集、处理与运送 返回章内容 现在七页，总共二十七页。 一、 病毒的分离培养 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞 羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种 组织细胞培养 鸡胚培养 动物接种 现在八页，总共二十七页。 1.组织细胞培养 鸡成纤维细胞 Hep-2细胞 细胞培养瓶 Vero细胞 第二节 病毒的分离与鉴定 现在九页，总共二十七页。 一般选用9～14d的鸡胚 来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等 2.鸡胚培养 优点： 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十页，总共二十七页。 选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键 常用的主要有： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十一页，总共二十七页。 2.鸡胚培养 尿囊腔接种 羊膜腔接种 尿 囊 腔 羊 膜 腔 常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养 常用于临床流感病毒初次分离 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十二页，总共二十七页。 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种 卵 黄 囊 绒毛尿囊膜 人工气室 羊膜腔 气室 绒毛尿囊膜 尿囊腔 卵白 2.鸡胚培养 主要用于虫媒病毒、衣原体及立克次体的分离和繁殖。 常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离 卵 黄 囊 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十三页，总共二十七页。 3.动物接种 常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等 常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十四页，总共二十七页。 二、病毒增殖的观察 （一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 2．红细胞吸附 3．细胞培养液pH值改变 （二）病毒数量及病毒感染性测定 1．血凝试验 2．中和试验 3．空斑形成试验 4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50） 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十五页，总共二十七页。 二、病毒增殖的观察 （一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 （1） 细胞病变效应（cytophathic effect，CPE） 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十六页，总共二十七页。 正常细胞 病变细胞 是指某些病毒特别是无包膜的病毒感染组织细胞后，正常生长的梭形细胞变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落，细胞堆积形成葡萄状 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十七页，总共二十七页。 （2）多核巨细胞 1．细胞形态的改变 多见于有包膜的病毒，如呼吸道合胞病毒、麻疹病毒等，由感染细胞融合而成多核巨细胞 第二节 病毒的分离与鉴定 现在十八页，总共二十七页。 （3）包涵体 1．细胞形态的改变 某些病毒感染宿主细胞后，细胞内出现一种光学