结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用.docVIP

结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用 文档信息 主题： 关于“医学心理学”中“肿瘤学”的参考范文。 属性： Doc-02APMJ，doc格式，正文8803字。质优实惠，欢迎下载！ 说明： 作为医学资料、肿瘤学资料的写作参考资料，提供解决怎么写及格式等相关问题。 适用： 作为文章写作的参考文献，解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容摘取等相关工作。 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用 2 0 引言 2 1 材料和方法 2 2 结果 4 3 讨论 7 文2：幼儿园音乐活动中教学工具的作用 9 一、多媒体参与， 让音乐欣赏活起来 10 二、乐器参与， 让音乐欣赏动起来 11 三、游戏参与， 让音乐欣赏玩起来 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用 文1：结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用 0 引言 结肠癌是主要的消化道恶性肿瘤，其发病率在我国逐年上升。尽管各种治疗方法在不断改进，但其预后始终不太理想。究其原因，主要是对结肠癌的浸润和转移缺乏强有力的干预。，与所有的恶性肿瘤一样，在结肠癌浸润和转移过程中，侵袭性伪足(invadopodia)的形成发挥了非常重要的作用[1]。细胞通过侵袭性伪足附着于细胞外基质并产生溶解细胞的物质突破基质屏障向周围侵袭[2]。细胞的内吞作用在此过程中发挥重要作用[325]，因此，以癌细胞内吞活动为切入点，将有助于理解癌细胞侵袭性伪足的作用过程及转移机制。然而到目前为止，有关结肠癌细胞内吞过程的机制还不清楚。有研究表明，癌基因ems1的表达产物cortactin（皮层蛋白）对细胞内吞活动的实现起关键作用 [6] ，但该分子在结肠癌细胞内吞活动中的作用如何尚未见研究报道。本实验通过分析结肠癌细胞中皮层蛋白与癌细胞内吞的关系，发现cortactin的表达影响结肠癌细胞的内吞活动。cortactin的氨基端和羧基端对于cortactin在内吞过程中发挥功能起关键作用。同时发现cortactin在结肠癌细胞的内吞过程中发生磷酸化。本文对此作首次报道。 1 材料和方法 材料 细胞株 选用人结肠癌细胞株ht29 (来自atcc) 抗体和试剂 一抗兔抗人cortactin单克隆抗体（美国upstate公司），鼠抗人rab5/11单克隆抗体（美国sigma公司）。罗丹明标记的马抗兔、荧光素标记的马抗鼠及抗转铁蛋白（tfn）抗体（购自美国sigma公司），cortactin磷酸化多克隆抗体（由美国马里兰大学实验室制备）。elisa试剂盒（美国sigma公司）。细胞转染试剂lipofectamine2000购自美国invitrogen公司。 重组质粒 以人全长cortactin cdna为模板设计引物并作pcr，将全长cortactin cdna、氨基端1～80aa缺失及羧基端sh3缺失片段分别克隆到逆转录病毒载体mgin，构建重组质粒。重组质粒由美国马里兰大学zhan试验室惠赠。 方法 细胞培养 人结肠癌细胞株ht29以10％小牛血清的rpmi 1640培养液，在37℃、5 ％co2条件下常规培养。取对数生长期细胞进行实验。 共聚焦显微镜检测 结肠癌细胞接种于放置盖玻片的6孔板内，应用完全培养基培养过夜。次日以磷酸盐缓冲液(pbs)洗涤细胞1次，以4％多聚甲醛在室温下固定30min，滴加一抗作用， 4℃过夜，次日用pbs洗涤细胞3次，应用荧光标记的二抗在室温下作用2h，再以pbs洗涤3次，缓冲甘油封片，至共聚焦显微镜下观察。 细胞蛋白提取与western blot 结肠癌细胞以pbs洗涤2次，加入细胞裂解液(50mmol／l tris．hcl、100mmol／l nacl、2mmol／l edta、1％ sds与蛋白酶抑制剂)。将细胞裂解液作变性聚丙烯酰氨凝胶垂直电泳，将蛋白转移至硝酸纤维素膜上，以5％ 的脱脂奶粉封闭(20mmol／l tris2hcl、150mmol／l nacl和％ tween220)。加入一抗4℃过夜，洗涤3次后，加入hrp标记二抗室温下1h，采用ecl试剂显影。 病毒转染及稳定表达重组质粒的细胞筛选 将重组病毒质粒和lipofectamine2000混合转染gpg293包装细胞，并在转染后24～72 h收集病毒上清液，将病毒上清感染ht29细胞并用g418筛选，获得稳定表达重组质粒的细胞株。 elisa测定 将细胞以1%bsa的无血清1640培养基，在37℃、5％co2培养箱中培养30